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[求助]
重組質粒酶切驗證沒有目的條帶
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在構建慢病毒表達載體時，搖完菌提質粒酶切。在進行第二次酶切后，插入的目的條帶電泳沒有顯示。這是為什么呢 本人構建完后提質粒先進行PCR驗證過，擴增出了目的條帶大小的片段，在第一步酶切時，電泳顯示條帶大小在10,000bp附近（我的載體為7.8kb, insert 為2250p）。后來分別用兩個酶酶切后，大小也對。 我該如何解決第二部酶切的問題。 個人設想的是： 分別酶切+單酶切酶切產(chǎn)物PCR+重組質粒PCR+兩步酶切后產(chǎn)物PCR=質粒構建成功。 不知可以不 |
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blackrose8089
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