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bjgymilyxz木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
對(duì)照組和試驗(yàn)組的Real-Time PCR 結(jié)果和Western結(jié)果相反
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各位親，最近試驗(yàn)遇到麻煩，很是不解。 對(duì)照組和誘導(dǎo)組的 培養(yǎng)細(xì)胞中目的基因的Real-Time PCR 結(jié)果，顯示： 目的gene在對(duì)照組和試驗(yàn)組都隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)上升；對(duì)照組表達(dá)水平〈誘導(dǎo)組 Western結(jié)果，顯示： 1. 分泌到培養(yǎng)基內(nèi)的目的蛋白： 對(duì)照組隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)上升；誘導(dǎo)組則隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)下降；而且，對(duì)照組表達(dá)水平〉誘導(dǎo)組 2.細(xì)胞內(nèi)目的蛋白： 對(duì)照組和誘導(dǎo)組都隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)上升；但是，對(duì)照組表達(dá)水平〉誘導(dǎo)組 P.S.: 所提取的蛋白質(zhì)BCA測(cè)定后濃度較低，進(jìn)行了TCA沉淀，但是，TCA沉淀后沒(méi)有測(cè)定所得總蛋白的濃度，直接進(jìn)行Western的。 本人對(duì)于該結(jié)果超級(jí)疑惑，不知道作何解釋�。� |
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新蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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bjgymilyxz: 金幣+2, ★有幫助 2014-01-30 13:00:34
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1、目的gene在對(duì)照組和試驗(yàn)組都隨培養(yǎng)時(shí)間增加而表達(dá)上升；對(duì)照組表達(dá)水平〈誘導(dǎo)組，但是否差異顯著？否則沒(méi)意義。 2、 所提取的蛋白質(zhì)BCA測(cè)定后濃度較低，進(jìn)行了TCA沉淀，但是，TCA沉淀后沒(méi)有測(cè)定所得總蛋白的濃度，直接進(jìn)行Western的，這樣樣品之間應(yīng)該沒(méi)什么可比性吧，上樣量不一樣，沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，怎么去比較？ |
2樓2013-11-13 12:48:23
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