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建庫(kù)酶切問(wèn)題求助��！
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| 建BAC文庫(kù)時(shí)，提取了細(xì)胞核DNA然后進(jìn)行低熔點(diǎn)瓊脂糖的包埋，制成了這個(gè)包埋塊。經(jīng)過(guò)蛋白酶K的處理后，進(jìn)行了不同濃度Hind III 的酶切，酶切了一個(gè)小時(shí)，之后跑的脈沖電泳，設(shè)置的場(chǎng)強(qiáng)為6V/cm，跑了20個(gè)小時(shí)。得到的這個(gè)結(jié)果。兩側(cè)的泳道是marker，中間泳道是酶切DNA的結(jié)果，設(shè)置了Hind III 酶的濃度梯度，從左到右分別為0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出來(lái)基本上沒(méi)有什么差別。很急，周圍沒(méi)有做這方面的，各位大俠指導(dǎo)一下吧！謝了！！ |
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2013-10-11 21:04:52, 158.15 K
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
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7樓2013-10-24 21:19:02
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-14 21:46:29
淺歌99: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-30 09:53:04
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淺歌99: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-30 09:53:04
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有沒(méi)有設(shè)對(duì)照？未酶切對(duì)照和過(guò)量酶切對(duì)照都要設(shè)。 另外從圖上可以看出你的plug質(zhì)量很差，酶切一個(gè)小時(shí)也太長(zhǎng)了，取1/3 plug做實(shí)驗(yàn)的話，正常情況下超過(guò)不要15min。可能蛋白、多糖或多酚類物質(zhì)去除不干凈，改善方法再重新制備plug吧。 |
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淺歌99
2樓2013-10-14 16:23:54
文庫(kù)構(gòu)建 
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 644.2
- 帖子: 60
- 在線: 11.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2722286
- 注冊(cè): 2013-10-14
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-24 19:04:30
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-10-24 19:04:30
| 構(gòu)建BAC文庫(kù)是一件非常復(fù)雜工作量的工作，大型BAC文庫(kù)篩選更是一件龐大的工程。去年我們實(shí)驗(yàn)室試做構(gòu)建過(guò)BAC文庫(kù)，遇到很多疑問(wèn)，由于項(xiàng)目緊迫，最終還是委托專業(yè)公司代做的。文庫(kù)平均插入片段在100kb以上，均一性良好。文庫(kù)質(zhì)量還不錯(cuò)。希望你能順利完成BAC文庫(kù)構(gòu)建篩選工作。 |
3樓2013-10-17 09:33:25
4樓2013-10-24 14:37:03
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