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[求助]
建庫酶切問題求助！！
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| 建BAC文庫時，提取了細(xì)胞核DNA然后進行低熔點瓊脂糖的包埋，制成了這個包埋塊。經(jīng)過蛋白酶K的處理后，進行了不同濃度Hind III 的酶切，酶切了一個小時，之后跑的脈沖電泳，設(shè)置的場強為6V/cm，跑了20個小時。得到的這個結(jié)果。兩側(cè)的泳道是marker，中間泳道是酶切DNA的結(jié)果，設(shè)置了Hind III 酶的濃度梯度，從左到右分別為0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出來基本上沒有什么差別。很急，周圍沒有做這方面的，各位大俠指導(dǎo)一下吧！謝了！！ |
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2013-10-11 21:04:52, 158.15 K
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8樓2013-10-25 18:44:44
【答案】應(yīng)助回帖
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有沒有設(shè)對照？未酶切對照和過量酶切對照都要設(shè)。 另外從圖上可以看出你的plug質(zhì)量很差，酶切一個小時也太長了，取1/3 plug做實驗的話，正常情況下超過不要15min。可能蛋白、多糖或多酚類物質(zhì)去除不干凈，改善方法再重新制備plug吧。 |
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淺歌992樓2013-10-14 16:23:54
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