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偶像的黃昏yy銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教關(guān)于DTNB�。�！ 已有3人參與
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| 測二硫鍵時，DTNB難溶于水，加熱后依然難溶，請問有哪位高手做過這個實驗，幫忙教一下 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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我也要做二硫鍵和巰基的測定，今天第一次配DTNB，是用ph8 的tris-甘氨酸直接稀釋定容的，發(fā)現(xiàn)DTNB有少量不溶，請教了下側(cè)過巰基的同學(xué)，他們說是把緩沖液的各種所需試劑和DTNB一起溶解溶解到離定容還剩一點體積的時候，再調(diào)節(jié)ph至8,再轉(zhuǎn)移到容量瓶定容。 然后我就做了個試驗，把DTNB溶于少量ph8上述緩沖液，發(fā)現(xiàn)pH 下降的蠻厲害的，所以我猜是因為這個原因，我用ph8的tris-甘氨酸緩沖液配dtnb才沒完全溶解。 最后，我用適量ph8的tris-甘氨酸緩沖液懸浮DTNB，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至8，最后用ph8的tris-甘氨酸緩沖液定容。 第一次配這個，好辛酸哦~文獻里都不寫細節(jié)，讓人走好多彎路，希望我的經(jīng)驗在你那也適用~ |
6樓2014-04-26 21:38:47
煜，莫煩惱
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3樓2013-10-14 14:37:26
7樓2014-04-26 21:40:11
user59888
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5080927&fpage=1 我不是很懂，但是里面很多人都做過，應(yīng)該懂，建議聯(lián)系他們，耐心請教 |
2樓2013-10-14 11:24:29
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4樓2013-10-14 15:34:17
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5樓2014-04-18 20:46:11
8樓2015-09-25 14:44:47
1012203014
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- 專業(yè): 化學(xué)反應(yīng)工程
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測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 謝謝了  |
9樓2015-09-25 20:42:47
1012203014
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測定總巰基含量時，15 mg蛋白樣品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 緩沖液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。測定自由巰基含量時，15 mg樣品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 緩沖液中，而后加入50 μL Ellman 試劑 （DTNB, 即5,5-二硫基雙2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 緩沖液，4 mg/mL），在25℃條件下保溫反應(yīng)60 min, 離心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 處測定吸光值，以含Ellman 試劑的Tris-Gly 緩沖液為空白對照。 巰基含量的計算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去試劑空白后樣品的吸光度值 D—稀釋倍數(shù) C—樣品濃度（mg/mL） 問題1：上述公式中稀釋倍數(shù)D是怎么算的（具體的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 問題2：我測的物質(zhì)為毛發(fā)固體樣品，二硫鍵含量在350μmol/g附近，此種測試方法是否具有可行性 |
10樓2015-09-25 20:43:08
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