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293細(xì)胞真核表達(dá)，最終表達(dá)在什么地方
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細(xì)菌粘附素重組質(zhì)粒在293細(xì)胞中表達(dá)，載體為pcDNA3。最終蛋白會(huì)表達(dá)在哪里？ 我用的是cell lysis buffer裂解細(xì)胞，離心取上清。然后western blot檢測(cè)，但是始終檢測(cè)不到特異表達(dá)。 求助求助 |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lipanxy2(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-10-31 13:28:19
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lipanxy2(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-10-31 13:28:19
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這個(gè)蛋白表達(dá)出來很有可能在細(xì)胞的胞漿里面，你用WB檢測(cè)不到特異表達(dá)，有幾種情況： 1. 你的抗體不靈，壓不出來?xiàng)l帶，是否有陽性對(duì)照？可以克隆一個(gè)帶tag的表達(dá)載體，比如在蛋白N或者C端fusion一個(gè)flag, HA 或者myc,His的tag，用tag抗體來檢測(cè) 2. 蛋白根本沒有表達(dá)，可能是克隆錯(cuò)誤，基因移碼突變了，或者表達(dá)載體有問題，檢查下載體構(gòu)建是否正確或者換個(gè)載體表達(dá) |
2樓2013-10-30 22:42:09
huoyongting
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| 您好，想了解一下您做293表達(dá)是如何做的，有相關(guān)的資料嗎，最近需要自己做，但是完全不會(huì)�。�！有更多真核蛋白表達(dá)相關(guān)方面的資料更好，謝謝，Q2387610666 |
7樓2015-07-27 16:57:28
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