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293細(xì)胞真核表達(dá)，最終表達(dá)在什么地方
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細(xì)菌粘附素重組質(zhì)粒在293細(xì)胞中表達(dá)，載體為pcDNA3。最終蛋白會表達(dá)在哪里？ 我用的是cell lysis buffer裂解細(xì)胞，離心取上清。然后western blot檢測，但是始終檢測不到特異表達(dá)。 求助求助 |
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huoyongting
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3樓2013-10-31 11:04:54
gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lipanxy2(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵交流 2013-10-31 13:28:19
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lipanxy2(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵交流 2013-10-31 13:28:19
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這個蛋白表達(dá)出來很有可能在細(xì)胞的胞漿里面，你用WB檢測不到特異表達(dá)，有幾種情況： 1. 你的抗體不靈，壓不出來條帶，是否有陽性對照？可以克隆一個帶tag的表達(dá)載體，比如在蛋白N或者C端fusion一個flag, HA 或者myc,His的tag，用tag抗體來檢測 2. 蛋白根本沒有表達(dá)，可能是克隆錯誤，基因移碼突變了，或者表達(dá)載體有問題，檢查下載體構(gòu)建是否正確或者換個載體表達(dá) |
2樓2013-10-30 22:42:09
4樓2013-10-31 15:16:17
5樓2013-10-31 15:29:23
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