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liondolphin銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助~~~~大腸桿菌內(nèi)質(zhì)粒會(huì)不會(huì)自行發(fā)生同源重組？
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| 現(xiàn)在在構(gòu)建質(zhì)粒，使用的菌株是大腸桿菌BL21（DE3），DH5a，在質(zhì)粒上加了三段終止子，都是一樣的，大約400+bp，話說(shuō)它們會(huì)不會(huì)發(fā)生同源重組呀，求高手解答~~~~~ |
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5樓2013-11-05 17:41:39
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2樓2013-11-05 12:38:13
3樓2013-11-05 15:11:28
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4樓2013-11-05 16:46:05
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 回帖置頂 2013-11-05 18:12:20
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liondolphin: 金幣+3 2013-11-07 10:58:58
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有可能，即使是重組酶缺失的菌株也存在同源重組的情況，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中就成功地使用DH5a進(jìn)行同源重組， [ Last edited by gyesang on 2013-11-5 at 18:12 ] |
6樓2013-11-05 18:04:04
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7樓2013-11-06 10:17:09
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我也發(fā)現(xiàn)用DH5a會(huì)發(fā)生重組，雖然概率比較低。 我現(xiàn)在構(gòu)建的一個(gè)質(zhì)粒里面有三對(duì)重復(fù)序列，長(zhǎng)度分別約300bp, 500bp, 1kb. 鑒定連接產(chǎn)物時(shí)，用菌液pcr看兩個(gè)接口是否正確，菌液搖幾個(gè)小時(shí)還是清澈的，不過(guò)pcr能出來(lái)，而且有很多陽(yáng)性克隆。搖過(guò)夜能看到細(xì)菌，但我懷疑長(zhǎng)出來(lái)的是雜菌，因?yàn)橘|(zhì)粒抽不出來(lái)。 現(xiàn)在這個(gè)載體都構(gòu)建半年多了，一直是這個(gè)問(wèn)題，菌液pcr鑒定正確，就是提不出質(zhì)粒，請(qǐng)高手指點(diǎn)下是怎么回事。我是懷疑把氨芐抗性基因的啟動(dòng)子破壞了，或者是復(fù)制子重組掉了。  |
8樓2014-02-21 12:58:32
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9樓2015-01-26 10:00:06
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10樓2015-01-26 10:06:04
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