 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 867 | 回復(fù): 3 | ||
子瀟楊帆金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助�。�！篩選分子標(biāo)記體系中的PCR問題
|
|
我采用SCoT分子標(biāo)記法對某個(gè)植物材料的擴(kuò)增體系進(jìn)行篩選優(yōu)化，建立了體系所需的5因素（模板，鎂離子，dNTP，引物，Taq酶）4水平共16個(gè)組合的梯度篩選體系，如下所列： Mg2+濃度/ mmol /L dNTPs濃度/mmol /L Taq 聚合酶濃度/U 引物濃度/μmol/ L 模板DNA 濃度/ng/μl 1 1.5 0.20 0.5 0.5 1.0 2 2.0 0.25 1.0 0.6 1.5 3 2.5 0.30 1.5 0.7 2.0 4 3.0 0.35 2.0 0.8 2.5 擴(kuò)增程序?yàn)? 94℃預(yù)變性 5 min；94℃變性 1 min，55℃退火 1 min，72℃ 延伸 2 min，共 32個(gè)循環(huán)；72℃最后延伸10 min。PCR 產(chǎn)物在0.8 %瓊脂糖凝膠，l×TAE緩沖液條件下電泳， 染色后觀察。電泳條件為電壓120，電流190，功率40 現(xiàn)在連續(xù)嘗試了4次，結(jié)果每次的電泳圖全是很嚴(yán)重的彌散狀，有的連MARKer都彌散了，看不清楚，請問懂這方面的師兄師姐哪位能給指點(diǎn)一下，我的問題出在哪兒？已經(jīng)有各因素的濃度梯度設(shè)置了，是不是只能從擴(kuò)增程序的改變上先嘗試解決彌散的問題，比如提高退火溫度，減少循環(huán)數(shù)等？這兩個(gè)措施我已經(jīng)嘗試過了，然后效果并不好，還是彌散。。。是不是模板的質(zhì)量不好，也會(huì)有彌散的情況出現(xiàn)？哪位前輩做過這類實(shí)驗(yàn)的能給指點(diǎn)指點(diǎn)吧？實(shí)在不知道問題出在哪兒，也不知道該怎樣改進(jìn)，不知道該怎樣向下進(jìn)行下一步試驗(yàn)了。。。。。。謝謝各位了�。。。。�！ 11-7（篩）1.jpg 11-7（篩2）1.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有183人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 誠心求教各位前輩：篩選擴(kuò)增體系時(shí)的PCR圖片，這是怎么回事��？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 藍(lán)白斑篩選白色菌落PCR無條帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
- SSR分子標(biāo)記的時(shí)候?yàn)槭裁床糠諨NA不能跑出來
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PCR出現(xiàn)不能解釋的條帶
已經(jīng)有17人回復(fù)
- ISSR-PCR的引物問題是只用1條？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 為什么有的樣品批不出來東西，DNA檢測時(shí)挺好的啊
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 一些生物上的小問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 急求答案：設(shè)計(jì)一個(gè)DNA分子標(biāo)記輔助輪回選擇的育種方案
已經(jīng)有15人回復(fù)
- SRAP引物到底應(yīng)該從多少個(gè)里去篩選？有什么原則呢？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 急求！設(shè)計(jì)一個(gè)生化分子的實(shí)驗(yàn)方法
已經(jīng)有4人回復(fù)
- “農(nóng)林生物質(zhì)工程”、“功能型食品的研制與開發(fā)”項(xiàng)目的課題驗(yàn)收工作順利完成
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】抗性基因序列如何得到？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】ISSR引物擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖，求助各位高手~~~
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】知道目的基因定位標(biāo)記，想知道目的基因序列信息，怎么辦
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【推薦】973 三維培養(yǎng)干細(xì)胞自我更新與定向分化的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】生物小實(shí)驗(yàn)求助
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】（5.20更新）PCR產(chǎn)物電泳沒有條帶，why?
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【討論】圖位克隆
已經(jīng)有17人回復(fù)
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 908 (博后)
- 金幣: 17148.7
- 散金: 1654
- 紅花: 121
- 沙發(fā): 41
- 帖子: 14518
- 在線: 2183.8小時(shí)
- 蟲號: 514340
- 注冊: 2008-02-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒學(xué)
2樓2013-11-10 11:18:33
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 908 (博后)
- 金幣: 17148.7
- 散金: 1654
- 紅花: 121
- 沙發(fā): 41
- 帖子: 14518
- 在線: 2183.8小時(shí)
- 蟲號: 514340
- 注冊: 2008-02-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒學(xué)
3樓2013-11-10 11:20:45
子瀟楊帆
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 579.5
- 帖子: 10
- 在線: 4.4小時(shí)
- 蟲號: 2723219
- 注冊: 2013-10-14
- 專業(yè): 園林學(xué)
4樓2013-11-10 15:14:09
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 子瀟楊帆 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +8 | z1z2z3879 2026-03-16 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +3 | 簡單點(diǎn)0 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級已過，有科研經(jīng)歷 +8 | 曦熙兮 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5 | 緒幸與子 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 梁成偉老師課題組歡迎你的加入 +8 | 一鴨鴨喲 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +4 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 步川酷紫123 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料專碩274一志愿陜西師范大學(xué)求調(diào)劑 +5 | 薛云鵬 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料080500調(diào)劑求收留 +3 | 一顆meteor 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|