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windycui鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
藍(lán)白斑篩選白色菌落PCR無條帶
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| 如題，最近在做藍(lán)白斑篩選，目的條帶是原來PCR產(chǎn)物切膠回收的，用的是寶生物的PMD18-T載體，感受態(tài)是自己實(shí)驗(yàn)室制的，在平板上過夜培養(yǎng)后有藍(lán)斑也有白斑，挑取白斑菌落，在PCR反應(yīng)體系中蘸一蘸進(jìn)行菌落PCR，但是電泳結(jié)果沒有條帶，請問各位蟲友是載體自連了嗎？多板均有藍(lán)斑白斑，都是載體自連嗎？ |
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 PCR技術(shù) |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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windycui(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-26 17:44:23
windycui: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，準(zhǔn)備下周重新做做試試 2013-07-27 10:28:13
windycui(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-07-26 17:44:23
windycui: 金幣+2, ★★★很有幫助, 謝謝，準(zhǔn)備下周重新做做試試 2013-07-27 10:28:13
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第一：你做PCR實(shí)驗(yàn)室做陽性對照么？沒有的話最有可能的是退火溫度的問題。 第二：陰性對照打錯(cuò)了，是陽性對照，TAKARA 上面的pMD18-T Vector 的說明書里面有介紹。 第三：可以挑些藍(lán)色的點(diǎn)進(jìn)行菌液PCR. |
8樓2013-07-26 13:14:23
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10樓2013-07-26 14:58:07
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