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笑笑2697

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 蛋白純化交流

最近在純化一分子量為10k的小蛋白，但是50mM咪唑就洗下了好多目的蛋白，這種情況應(yīng)該怎么改變純化條件呢？

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1樓 2013-11-10 15:15:39

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gaolei0529

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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可以考慮使用pH梯度洗脫，另外His的特異性不好，純度估計(jì)比較麻煩，你純化的目的是什么？可以考慮離子柱或者反相。

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8樓2013-11-13 15:14:50

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Lovebirdshs

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-10 23:00:53

這個(gè)蛋白也太小了點(diǎn)，一般是先用適當(dāng)體積不含咪唑或者是低濃度如20mM咪唑的wash Buffer洗脫雜蛋白，然后再用高濃度的，梯度濃度50-75-100-150-300，當(dāng)然任何蛋白都有一個(gè)自己最適合的洗脫濃度，這個(gè)需要預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索的
慢慢來(lái)，祝早日純化成功

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孤獨(dú)的舞者

2樓2013-11-10 20:07:07

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jurkat.1640

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咪唑洗脫只能調(diào)節(jié)咪唑的濃度，總會(huì)有損失，目的蛋白表達(dá)量明顯是純化的前提條件。

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3樓2013-11-11 15:28:17

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haojunfeng87

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洗脫的時(shí)候先用不含咪唑的buffer,然后再依次提高咪唑的濃度，摸索一下吧，祝成功。

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4樓2013-11-12 12:06:51

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普通表情龍兔虎貓

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