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tiankong很藍(lán)

銀蟲 (小有名氣)

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[求助] 瓊脂糖凝膠電泳怪現(xiàn)象

求助：我用分子量為4000bp左右的質(zhì)粒跑瓊脂糖電泳，點(diǎn)的marker為2000的，每次跑膠的結(jié)果中4000bp的目的條帶與marker中2000的條帶的距離有時(shí)近有時(shí)遠(yuǎn)，距離不定，請(qǐng)問(wèn)這是為什么�。�

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1樓 2013-11-15 12:48:19

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doglet

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-11-15 16:10:58
tiankong很藍(lán): 金幣+5, ★有幫助 2013-11-18 16:53:47

首先你的質(zhì)粒有沒(méi)有做過(guò)酶切，沒(méi)有的話由于不同的分子構(gòu)型，可能會(huì)不能體現(xiàn)真正的分子量大小，第二，選用適合的marker，才能正確體現(xiàn)分子量的大小，每次行膠的條件不一致，必然看起來(lái)每次不同

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3樓2013-11-15 15:15:43

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三蟄

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【答案】應(yīng)助回帖

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-15 16:27:24

質(zhì)粒提取后沒(méi)有酶切的話，應(yīng)該有三條條帶。如果只有一條那就不對(duì)。另外，電泳過(guò)程中膠的質(zhì)量不同和電泳電壓等條件都會(huì)出現(xiàn)條帶距離不定的現(xiàn)象。

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我不會(huì)！

4樓2013-11-15 16:24:58

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liulugang

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10樓: Originally posted by tiankong很藍(lán) at 2013-11-18 11:31:49
是啊，每次酶切后相同質(zhì)粒條帶的位置都有變化，而且變化還很大。不知道是為什么...

提取的質(zhì)粒大多以超螺旋或開(kāi)環(huán)構(gòu)型存在，酶切過(guò)后，質(zhì)粒呈線性狀態(tài)，跑膠結(jié)果相對(duì)于超螺旋或開(kāi)環(huán)肯定會(huì)變化。lz有做單切和空白對(duì)照嗎？這樣有助于您判斷跑膠位置變化的原因。

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11樓2013-11-18 14:09:38

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tiankong很藍(lán): 金幣+5 2013-11-19 09:05:04

看了你的圖后
1第一甬道的是質(zhì)粒，有3條帶，大量的是超螺旋，說(shuō)明質(zhì)粒提的還可以，酶切后有兩條帶，但是小條帶分子量與預(yù)期不符，看看原始質(zhì)粒是否正確，換一個(gè)含有5kb-4kb的marker，用單酶切成一條帶看條帶大小對(duì)不對(duì)，否則光用眼睛看是不準(zhǔn)的

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15樓2013-11-19 08:54:31

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bolysu

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-11-15 16:27:18

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2樓2013-11-15 13:44:24

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2樓: Originally posted by bolysu at 2013-11-15 13:44:24
這個(gè)和你提的質(zhì)粒質(zhì)量有關(guān)的，質(zhì)量好就會(huì)小，質(zhì)量不好就會(huì)大

可我是用提取的同一批質(zhì)粒跑電泳，結(jié)果不同

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5樓2013-11-15 18:11:38

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zh10246

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沒(méi)有酶切的質(zhì)粒電泳主要是看看有沒(méi)有，判斷大小要酶切

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6樓2013-11-15 19:30:02

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3樓: Originally posted by doglet at 2013-11-15 15:15:43
首先你的質(zhì)粒有沒(méi)有做過(guò)酶切，沒(méi)有的話由于不同的分子構(gòu)型，可能會(huì)不能體現(xiàn)真正的分子量大小，第二，選用適合的marker，才能正確體現(xiàn)分子量的大小，每次行膠的條件不一致，必然看起來(lái)每次不同

我有做雙酶切，但是酶切結(jié)果一直得不到所需片段（所需片段是796bp，但酶切后出現(xiàn)的片段有時(shí)在marker的1000處有時(shí)在500bp處），而且只有少量酶切片段，大量質(zhì)粒沒(méi)有切開(kāi)。一直找不到原因，不知道為什么得不到目的片段，猜想是不是marker的原因，有可能在1000處或500bp處的酶切片段就是我所需要的。您說(shuō)，有可能嗎？

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7樓2013-11-15 20:24:05

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4樓: Originally posted by 三蟄 at 2013-11-15 16:24:58
質(zhì)粒提取后沒(méi)有酶切的話，應(yīng)該有三條條帶。如果只有一條那就不對(duì)。另外，電泳過(guò)程中膠的質(zhì)量不同和電泳電壓等條件都會(huì)出現(xiàn)條帶距離不定的現(xiàn)象。

但是目的條帶出現(xiàn)的位置差異很大，膠的質(zhì)量和電壓等條件會(huì)有這么大影響嗎。（我一般用：0.25g瓊脂糖+25mLTAE緩沖液，60V、40mA電泳）

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8樓2013-11-15 20:29:00

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瓊脂糖應(yīng)用濃度表示，用g數(shù)表示不能代表濃度大小，電流和電壓不是問(wèn)題，酶切后與marker相比較才能確定正確大小，否則怎樣都是不確定的

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9樓2013-11-16 07:11:40

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9樓: Originally posted by doglet at 2013-11-16 07:11:40
瓊脂糖應(yīng)用濃度表示，用g數(shù)表示不能代表濃度大小，電流和電壓不是問(wèn)題，酶切后與marker相比較才能確定正確大小，否則怎樣都是不確定的

是啊，每次酶切后相同質(zhì)粒條帶的位置都有變化，而且變化還很大。不知道是為什么

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