 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 2488 | 回復(fù): 14 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
小二丫結(jié)婚金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
大腸桿菌基因工程菌表達的L-門冬酰胺酶純化及酶活測定方法，求指點！ 已有1人參與
|
|
| 本人構(gòu)建了一株大腸桿菌基因工程菌，誘導(dǎo)后用于發(fā)酵產(chǎn)L-門冬酰胺酶（原設(shè)計是胞外表達），我是直接將發(fā)酵液掛Ni柱子純化蛋白（有組氨酸標簽），用誘導(dǎo)前發(fā)酵液、誘導(dǎo)后發(fā)酵液、純化的目的蛋白同時跑電泳，結(jié)果沒看到目的蛋白分子量大小的條帶。還有，將發(fā)酵液離心后的上清液和菌體洗滌后懸浮再破壁的溶液同時測酶活（奈斯勒試劑顯色法：1ml0.04M的天冬酰胺底物加1ml0.02MpH=8的磷酸鹽緩沖液，37度水浴5min預(yù)熱后，加入粗酶液500ul37度反應(yīng)15min后，加入1ml50%的三氯乙酸終止反應(yīng)。再從終止管里取500ul加到3.5ml蒸餾水中，加入1ml奈斯勒試劑顯色15min，500nm處測OD值），結(jié)果值很低；在測OD值之前我將渾濁的反應(yīng)液都離心過了，加入奈斯勒試劑后明明看到顏色變得深黃，然后測OD值時卻顯示很低，實在不知道原因。請各位高手給點建議~~~謝謝 |
回復(fù)此樓» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
最晴天beauty» 猜你喜歡
環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
085601一志愿西北工業(yè)大學(xué)初試346
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
本2一志愿C9-333分，材料科學(xué)與工程，求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
070300化學(xué)279求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
085601一志愿中山大學(xué)深圳材料工程330求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
293分求調(diào)劑，外語為俄語
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
0856調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿大連理工大學(xué)材料求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
xdfy0301
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1783.1
- 帖子: 27
- 在線: 13.9小時
- 蟲號: 1126194
- 注冊: 2010-10-19
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
11樓2013-12-27 12:11:46
xdfy0301
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1783.1
- 帖子: 27
- 在線: 13.9小時
- 蟲號: 1126194
- 注冊: 2010-10-19
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
2樓2013-12-09 12:37:31
小二丫結(jié)婚
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1179.3
- 紅花: 3
- 帖子: 25
- 在線: 26.2小時
- 蟲號: 1452506
- 注冊: 2011-10-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 食品科學(xué)
3樓2013-12-09 15:07:44
ruoqiu.xiao
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 1.4
- 紅花: 4
- 帖子: 220
- 在線: 250.7小時
- 蟲號: 2428367
- 注冊: 2013-04-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
只說酶活測定方法，我個人的理解： 1. 粗酶液里面有沒有含氮有機物啊，菇?jīng)瞿阌心居凶隹瞻讓φ瞻?是酶樣自己的空白對照，不是標準品的對照)，就是先加三氯乙酸，然后水浴15min，水浴結(jié)束后再加粗酶液。 2. 標準品對照問題，硫酸銨標準品濃度多少，A500多少？與酶樣A500相比怎么樣？ 3. 酶活定義問題，菇?jīng)瞿闶侨绾味x酶活的 (比如可以定義1min生成1μmole氨定義為1U)？理論上根據(jù)硫酸氨標準品濃度和門冬酰胺酶反應(yīng)時間， 可以計算出硫酸銨標準品代表多少酶活的，這樣才能計算你粗酶液的酶活，粗酶液A500低不代表酶活低 4. 奈斯勒試劑是自己配的還是買的碘化汞鉀？建議你在測定時候看看A500穩(wěn)定不穩(wěn)定，如果用碘化汞鉀的話，讀數(shù)有可能是不太穩(wěn)定的。 這個是中國藥典里面的門冬酰胺酶酶活測定方法： http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6333558&fpage=1 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2013-12-10 19:51:27
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-30 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085701環(huán)境工程求調(diào)劑 +11 | 多久上課 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +8 | Y-cap 2026-03-29 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +15 | 誰不是少年 2026-03-29 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 抱歉 +3 | 田洪有 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿廈門大學(xué)材料工程專碩354找調(diào)劑！��！ +5 | 貝唄鋇鋇 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 262求調(diào)劑 +4 | ZZ..000 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科211生物醫(yī)學(xué)工程085409求調(diào)劑339分 +3 | 里子木yy 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 337求調(diào)劑 +6 | 《樹》 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +12 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +10 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +4 | 種圣賜 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 起個名咋這么難 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)一志愿南京師范大學(xué)303求調(diào)劑 +3 | zzffylgg 2026-03-24 | 3/150 |
|