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anna87新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
表達(dá)載體的選擇及連接 已有1人參與
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| 目的基因連到PMD18-T。轉(zhuǎn)化DH5α，挑菌斑搖菌測(cè)序正確，再怎么連到表達(dá)載體上 需要準(zhǔn)備什么 謝謝 |
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gyesang
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2樓2013-11-25 15:28:09
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3樓2013-11-25 18:26:39
doglet
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4樓2013-11-25 20:41:34
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-12 15:35:35
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-12 15:35:35
| 如果要做表達(dá)，目的基因如果是PCR獲得，先要測(cè)序，序列正確后可以做進(jìn)一步克隆。根據(jù)你要做表達(dá)的體系考慮是否有稀有密碼子。如果有，需要替換才能高效表達(dá)。一般在設(shè)計(jì)基因表達(dá)時(shí)，在第一步PCR設(shè)計(jì)引物時(shí)就要考慮連到什么表達(dá)載體里，選擇合適的酶切位點(diǎn)克隆。因?yàn)樽鲆淮蜳CR，就可能有堿基錯(cuò)配的可能，盡量避免反復(fù)PCR來(lái)獲取基因。 |
5樓2013-11-26 08:48:06
呀薯?xiàng)l
金蟲(chóng) (小有名氣)
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- 金幣: 1001.5
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6樓2013-12-12 09:16:46
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