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liangpz鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
提取RNA時(shí)，有誰(shuí)用過水飽和酚配試劑嗎？幾個(gè)提取相關(guān)問題，求幫助��！
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新人最近提植物的RNA，老板指定用一個(gè)新改進(jìn)的CTAB/酸酚法。有幾處不懂的地方想問問提取RNA的前輩們~~回答有用的話有金幣啦，請(qǐng)大家?guī)蛶兔Π。�！~ 1 方法文獻(xiàn)里面是：Extraction buffer II Acidic phenol (pH 4.5) (Sigma,USA), 2.5 M sodium chloride (Sigma, USA), 0.5% SDS. 這是用水飽和酚做緩沖液Ⅱ的溶劑的意思嗎，要配置100ml的緩沖液Ⅱ，就吸取100ml水飽和酚，直接向里面加入NaCl和SDS溶解就行了？ 水飽和酚是吸取下層使用嗎？最后配好緩沖液后，用吸取一些原來水飽和酚的上層保護(hù)液進(jìn)行保護(hù)嗎？ 2 緩沖液Ⅰ是：CTAB, 2% (w/v)；3.5 M 硫氰酸胍 (GTC)；100 mM 檸檬酸緩沖液 (pH 4.5)；3 M 醋酸鉀；1.0% 十二烷基磺酸鈉 (SDS) (使用前加入)；RNase-free水定容。 想問問大家，配含有CTAB的試劑時(shí)，是不是應(yīng)該最后加CTAB？否則配出來的試劑最上面會(huì)有一層白色的沫，感覺像是CTAB不溶，即便搖勻也一會(huì)兒就又分層了。 3 最后是配好的試劑用高壓滅菌嗎？異硫氰酸胍和水飽和酚都不穩(wěn)定，都不能滅吧？就只剩下 LiCl能滅一下了。 |
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sz123321
木蟲 (正式寫手)
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樓主這方法就是異硫氰酸胍的提RNA方法，是很成熟的一種提法，是我們實(shí)驗(yàn)室通用的，我經(jīng)常用這個(gè)方法，很好用，我發(fā)給你吧。你看了還有問題再問。 百度網(wǎng)盤鏈接http://pan.baidu.com/s/1zPclO |
2樓2013-11-25 22:15:43
liangpz
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3樓2013-11-26 15:44:15
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