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PCR單引物擴(kuò)增問題
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小弟做了幾個(gè)1kb左右的目的片段的擴(kuò)增pcr,沒想到結(jié)果是這樣,一個(gè)博士跟我說這是單引物擴(kuò)增,還有可能退火溫度太低等等,不是很具體,想問問懂行的或者以前遇到過這種問題的大神們,怎么避免,如何改進(jìn)? 24-26,12.5.png |


鐵桿木蟲 (正式寫手)

新蟲 (初入文壇)
| 這種應(yīng)該就是非特異性擴(kuò)增,可能跟你的引物設(shè)計(jì)有關(guān),專一性不是很強(qiáng).想要避免非常困難,因?yàn)槟悴豢赡茉谧鲈囼?yàn)前就知道擴(kuò)增的結(jié)果. 一般要改進(jìn)的話,可以提高退火溫度,降低模板濃度或者降低引物濃度.當(dāng)然有些時(shí)候如果你的pcr buffer 有問題的話也會(huì)導(dǎo)致這種情況。如果反復(fù)設(shè)計(jì)引物都不成功的話,就要考慮是否是模板出問題了。 |
金蟲 (正式寫手)
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