 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2088 | 回復(fù): 9 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
山水88木蟲 (正式寫手)
|
[求助]
請(qǐng)教做過基因染色體整合的大俠們
|
||
|
我現(xiàn)在想做基因染色體整合，看文獻(xiàn)中所整合的基因有不同形式的。有的是說所整合的基因帶的是自有啟動(dòng)子，但我不明白基因的自有啟動(dòng)子是指什么，ATG開始就可以了還是說前面有一段課本上所說的-35序列什么的？還有的是基因前面加了Ptac或或者T7等啟動(dòng)子，那這些基因是怎么表達(dá)的呢，需要IPTG誘導(dǎo)什么的呢還是說不用誘導(dǎo)就可以自己表達(dá)了？ 總的就是我想知道我要整合基因是只將該基因ATG到TAA之間的序列整合上去還是說ATG前面應(yīng)該有什么序列才能保證基因能夠正常表達(dá)？分子生物學(xué)沒學(xué)好，還望各位不吝賜教，謝謝大家了！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有203人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 如何分辨不同染色體上的同一種基因？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 如何找到水稻一段序列的上下游序列？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 氯霉素抗性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入氯霉素抗性的宿主菌，請(qǐng)問如何鑒定是否成功轉(zhuǎn)入��？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 如何檢測植物染色體中基因的純合度？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 如何克隆一個(gè)在小鼠、大鼠中序列已知，但在人未知的基因？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請(qǐng)教De novo測序相關(guān)問題 如染色體推測基因組
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 質(zhì)粒上的基因敲除與染色體上的基因敲除有什么區(qū)別嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求蛋白質(zhì)相互作用研究方法...
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒跟目的基因連接不上怎么辦
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】小弟對(duì)啟動(dòng)子序列的確定有惑，望解惑。
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】尋找基因組序列中的單拷貝基因
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【其他】為什么會(huì)有單拷貝基因呢？弱弱地問一下
已經(jīng)有9人回復(fù)
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
|
1.. -10和-35是狹義上的啟動(dòng)子，一般的啟動(dòng)子要包含更長的序列。如果你要克隆一個(gè)基因的啟動(dòng)子，不是50bp就能解決的。整合到染色體上的基因比在質(zhì)粒上表達(dá)穩(wěn)定，但是由于拷貝數(shù)的限制，同樣的啟動(dòng)子表達(dá)量可能不如在質(zhì)粒上高。有研究表明增加拷貝在染色體上可以提高表達(dá)效果。 2. T7啟動(dòng)子本身不是誘導(dǎo)型的。T7啟動(dòng)子只能被T7 RNA聚合酶識(shí)別，而這個(gè)酶在原始的大腸桿菌里是沒有的，一些工程菌在染色體上整合了T7 RNA聚合酶基因，而這個(gè)基因是由lac operon調(diào)控的，因而T7啟動(dòng)子下游的基因可以被IPTG誘導(dǎo)。DE3是表達(dá)蛋白常用的工程菌株，可以識(shí)別T7啟動(dòng)子。 3. 做大腸桿菌表達(dá)的話，你提到過的T7和tac都是常用的強(qiáng)啟動(dòng)子。 |
4樓2013-12-10 15:13:56
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
山水88: 金幣+20, ★★★很有幫助 2013-12-10 10:11:35
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-10 11:04:38
山水88: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2013-12-11 12:11:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
山水88: 金幣+20, ★★★很有幫助 2013-12-10 10:11:35
kx444555: 金幣+5, 鼓勵(lì)交流 2013-12-10 11:04:38
山水88: 金幣+30, ★★★★★最佳答案 2013-12-11 12:11:03
|
啟動(dòng)子是指DNA序列中RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合的序列。任何基因的表達(dá)都是需要有啟動(dòng)子的。ATG是起始密碼子，不是啟動(dòng)子。原核生物的啟動(dòng)子是指ATG上游-10和-35的特定序列。啟動(dòng)子有很多，分為誘導(dǎo)型和組成型。常用于做表達(dá)的啟動(dòng)子是誘導(dǎo)型的。你說的tac啟動(dòng)子是誘導(dǎo)型的，T7是組成型的。 整合基因到染色體的目的是做表達(dá)的話，一般要根據(jù)需要加啟動(dòng)子，可以用強(qiáng)啟動(dòng)子，或者誘導(dǎo)啟動(dòng)子（誘導(dǎo)啟動(dòng)子往往和宿主有關(guān)）。只克隆起始密碼子到終止密碼子的話，基因不會(huì)表達(dá)或者以極低水平的本底表達(dá)，通常不能用來研究基因功能。 |
2樓2013-12-10 05:47:06
山水88
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 2526.7
- 散金: 190
- 紅花: 2
- 帖子: 389
- 在線: 280.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1071557
- 注冊: 2010-08-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
|
非常感謝您的指導(dǎo)！我還是有以下疑問： 1、我是往大腸桿菌染色體上添加基因，如果是用基因自帶啟動(dòng)子，應(yīng)該就是加上它前面的-10、-35特定序列，也就是大概50bp就可以了吧。但是這有個(gè)問題，因?yàn)槲覀兪亲龉こ叹褪窍脒^表達(dá)其中幾個(gè)關(guān)鍵基因，我看過有的文章介紹用質(zhì)粒載體做表達(dá)可能沒有在染色體上整合來的穩(wěn)定，那僅僅是給它單純的在染色體上添加一個(gè)基因拷貝數(shù)效果會(huì)好嗎？ 2、你說的T7啟動(dòng)子是組成型啟動(dòng)子，但是pET載體質(zhì)粒中的表達(dá)都要IPTG誘導(dǎo)的，這是怎么回事呢？如果我把要表達(dá)的基因ATG前面加上T7啟動(dòng)子序列然后放進(jìn)染色體中，它會(huì)表達(dá)嗎或者仍然需要IPTG誘導(dǎo)表達(dá)？因?yàn)槲铱吹絋7啟動(dòng)子需要T7 RNA 聚合酶的作用，用DE3化的菌株可以解決這個(gè)問題嗎？ 3、另外就是想請(qǐng)您幫我推薦幾種可以直接在染色體上表達(dá)的強(qiáng)啟動(dòng)子。 問題比較多，再次感謝！ |
3樓2013-12-10 09:18:18
山水88
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 2526.7
- 散金: 190
- 紅花: 2
- 帖子: 389
- 在線: 280.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1071557
- 注冊: 2010-08-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物技術(shù)藥物
5樓2013-12-10 16:36:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +4 | 加一一九 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +4 | 13831862839 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)280分求調(diào)劑 +7 | 722865 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)求調(diào)劑 +6 | Stella_Yao 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +4 | 八6八68 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +3 | 你好明天你好 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑 +5 | Surekei 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料 271求調(diào)劑 +5 | 展信悅_ 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑0854 +3 | assdll 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ^O^乜 2026-03-19 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué) 學(xué)碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|