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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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想學(xué)好的學(xué)渣

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[求助] 測(cè)序回來(lái)，序列中找不到下游引物，求救啊。。。。。已有8人參與

RT，本以為跑出來(lái)了，特別開(kāi)心，因?yàn)橛玫氖呛?jiǎn)并引物，而且簡(jiǎn)并度不算很高，換了很久的體系。
結(jié)果測(cè)序回來(lái)，只有上游引物，下游的沒(méi)有，瞬間就無(wú)力了，打擊有些大
和師姐分析了下，想是不是模板的問(wèn)題，反轉(zhuǎn)錄的模板放了差不多6個(gè)月了，因?yàn)槭桥R近暑假的時(shí)候提出來(lái)的。關(guān)于引物設(shè)計(jì)，還是打算用簡(jiǎn)并引物，各位師兄師姐能不呢給提些建議呢
我是一個(gè)剛剛接觸分子沒(méi)多久的菜鳥(niǎo)，也在看文獻(xiàn)，可是感覺(jué)好多不懂，查了后還是有很多疑惑，不曉得該怎么辦了，還有就是文獻(xiàn)這方面看哪些比較好呢，我做的是植物基因克隆與分析這個(gè)方向

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測(cè)序結(jié)果去除載體序列已經(jīng)有3人回復(fù)
基因的下半部分已經(jīng)測(cè)序完成，引物設(shè)計(jì)了兩次上半部分總是擴(kuò)不出來(lái)是什么原因？已經(jīng)有11人回復(fù)
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1樓 2013-12-13 18:02:38

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半生一夢(mèng)

木蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
想學(xué)好的學(xué)渣: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-17 18:31:01
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-12-18 08:55:27

下游引物要反向互補(bǔ)一下才能找得到的吧。。。。
感覺(jué)cDNA做普通PCR的話貌似可以放很久呢
要不連載體轉(zhuǎn)化下感受態(tài)再去測(cè)序試試哎那個(gè)還是很準(zhǔn)的

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9樓2013-12-15 13:38:35

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三蟄

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

我覺(jué)得很正�！皫资畟€(gè)堿基測(cè)得不準(zhǔn)。有時(shí)能夠測(cè)出來(lái)，有時(shí)候會(huì)發(fā)生偏差

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我不會(huì)！

2樓2013-12-13 21:42:18

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cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-12-18 08:55:35

如果你要找測(cè)序時(shí)用的引物，很可能看不到。在靠近引物附近的干擾很大，有一二十個(gè)堿基測(cè)不出來(lái)是正常的。

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3樓2013-12-14 01:38:18

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bolysu

禁蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

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4樓2013-12-14 09:32:32

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普通表情龍兔虎貓

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