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嗰嘰嗰嘰金蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌為模板，想P其中一段基因，是提取它的基因組再PCR還是直接菌液PCR？ 已有1人參與
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luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-01-29 16:28:22
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菌液PCR重復(fù)性很差，菌液PCR其實(shí)就是通過(guò)高溫變性這一步把細(xì)胞裂解掉使其DNA暴露釋放出來(lái)，用釋放出來(lái)的基因組做模板的PCR反應(yīng)，但是由于你加的菌體濃度和菌體生長(zhǎng)狀態(tài)不同，你每次菌液PCR實(shí)際上模板的濃度都是不一樣的！~模板濃度的忽高忽低又反過(guò)來(lái)影響你的整個(gè)PCR反應(yīng)的效果~，也就是說(shuō)你有時(shí)候能P出來(lái)，你有時(shí)候就完全有可能P不出來(lái)~~有時(shí)候量多有時(shí)候量少，這種存在無(wú)法重復(fù)出來(lái)風(fēng)險(xiǎn)的PCR，你會(huì)把他作為你下一步實(shí)驗(yàn)的出發(fā)點(diǎn)嗎？ 而且如果你的實(shí)驗(yàn)一開(kāi)始是用菌落PCR拿的基因，別人完全有理由質(zhì)疑你實(shí)驗(yàn)的可靠性，就算你后續(xù)實(shí)驗(yàn)上T載體測(cè)序正確，也會(huì)給人一種你的實(shí)驗(yàn)很缺乏嚴(yán)謹(jǐn)性的印象。會(huì)給自己制造一些不必要的麻煩~~ |
9樓2013-12-26 21:11:55
gyesang
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2樓2013-12-19 20:41:53
嗰嘰嗰嘰
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3樓2013-12-19 20:55:15
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4樓2013-12-20 11:46:59
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