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woshiguiren木蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教，鎳柱純化蛋白后，鎳柱上的咪唑用除去嗎？ 已有4人參與
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| 本人做了一段時間鎳柱蛋白純化的實驗，知道咪唑會和蛋白競爭性與鎳柱結(jié)合，從而使His-tag蛋白從鎳柱上脫離。想請教，純化結(jié)束后，結(jié)合到鎳柱上的咪唑用除去嗎？如果用，怎么除去？如果不用，那么對下一次的蛋白掛住有影響嗎？（實驗所用鎳柱為GE公司His-tag鎳柱） |
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過完鎳柱后，用超純水沖沖柱子就可以，一般不會影響下次掛鎳 這樣用過幾次后就需要再生， 我們用的步驟是 1.脫鎳Buffer（含EDTA）沖洗1-2個柱體積 2.超純水沖洗3個柱體積 3.用0.5mol/L的NaOH沖洗0.5-1柱體積 4.超純水沖洗3個柱體積 5.用1M硫酸銅掛鎳 |
4樓2014-01-01 22:40:44
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