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tagzhh木蟲 (著名寫手)
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[求助]
HPLC每次進(jìn)樣，壓力都漲一點(diǎn)，怎么辦 已有4人參與
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我是要做花蛤中軟骨藻酸的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，花蛤我是勻漿后，用甲醇和水，1:1，來(lái)進(jìn)行提取的，重復(fù)提取兩次。離心取了上清液，過(guò)0.22um有機(jī)膜，進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)每進(jìn)一針，壓力就漲5bar左右或更多，然后平穩(wěn)，再進(jìn)樣又高，并且不回落。于是不敢往下做了。 后覺(jué)的是上清液遇到我的流動(dòng)相，使得蛋白質(zhì)析出在柱子了，導(dǎo)致壓力升高。于是第二次勻漿液中，我用了甲醇和2%的TCA，還是1:1。離心取了上清液，特意在進(jìn)樣前取了少許上清，滴加了TCA看沒(méi)有渾濁了，于是進(jìn)樣，還是一進(jìn)樣，壓力就漲一點(diǎn)，然后平穩(wěn)跑，再進(jìn)再高，如階梯般。于是不敢再往下做了。 方法是參照國(guó)標(biāo)記憶喪失性貝類毒素軟骨藻酸的測(cè)定，只不過(guò)不管其他文獻(xiàn)還是國(guó)標(biāo)，都在有了上清液后，用固相萃取柱凈化了一下，可老師不讓我這樣子。 用的柱子是Zorbax 300SB-C18，2.1*150,5um [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] [ Last edited by tagzhh on 2013-12-29 at 08:53 ] |
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