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penglin1984新蟲 (初入文壇)
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[交流]
血漿蛋白結(jié)合率高的藥物如何進(jìn)行前處理？
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最近做血漿樣品遇到了這樣的情況：做方法學(xué)的時(shí)候，空白血漿添加藥物出的峰形很好，與雜質(zhì)峰的分離度等都很好，所有方法學(xué)考察的數(shù)據(jù)都很好。到做實(shí)際樣品的時(shí)候問(wèn)題出現(xiàn)了，在進(jìn)樣后1min的時(shí)候以及目標(biāo)峰剛結(jié)束的時(shí)候出了兩個(gè)很大的雜峰（不成峰形，就是一大坨），后面那個(gè)雜峰干擾目標(biāo)峰。剛開始以為是進(jìn)樣時(shí)間長(zhǎng)了導(dǎo)致柱子臟（實(shí)際上柱壓沒變化），就用常規(guī)沖洗方法反復(fù)沖洗色譜柱，再進(jìn)樣還是這個(gè)情況，而且很有規(guī)律：每次序列進(jìn)樣前5個(gè)樣品沒問(wèn)題，從第6個(gè)樣品開始那兩個(gè)大雜峰就出現(xiàn)了。百思不得其解，后來(lái)查藥物手冊(cè)才知道這個(gè)藥物與血漿蛋白的結(jié)合率達(dá)99%。 我的前處理方法是：200uL血漿+2mL正己烷/異丙醇（95：5，V/V）渦旋2min后10000r/min離心10min,取上層40度N2吹干，流動(dòng)相復(fù)溶，12000r/min離心10min,取上清HPLC檢測(cè)。 嘗試過(guò)加酸（1mol/L鹽酸）或者乙腈等沉淀蛋白方法，雜峰多、干擾嚴(yán)重且回收率低。用我上述方法回收率等方法學(xué)數(shù)據(jù)很好，峰形也很好，就是做實(shí)際樣品時(shí)出現(xiàn)了那樣的情況。 想請(qǐng)群里的朋友幫忙想想辦法，解決這個(gè)問(wèn)題！謝謝！ |
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