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海之韻-哈哈銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
native-page活性染色 已有3人參與
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| 最近在做native-page活性染色，蛋白為木聚糖酶，理論上染色脫色后目的條帶處應為無色且為單一條帶，膠的其余部分應為紅色。但是我做出來的結果是從點樣孔到膠的三分之一處是無色的，而不是一條單一的條帶，感覺目的蛋白是邊跑邊反應。（跑膠時是在冰浴中進行的）請問有沒有這種邊跑邊反應的可能性��？如何避免這種情況？ |
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5樓2014-01-05 18:40:56
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8樓2014-01-06 21:47:18
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【答案】應助回帖
| 原因很明顯，就是在浸泡的時候酶把底物降解了，理論上來說，酶在跑過的地方是不會停留的，實際上是會有很少很少的酶是停留了的，在電泳結束后，保溫的時候就會也參與降解底物。而且，酶在電泳過程中是會發(fā)揮一點點降解底物的能力的。我認為就是這兩個原因造成你的降解區(qū)有點拖，下次所有條件不變，將酶再次稀釋吧，就不止是100倍這么簡單了，250、1000、2500和1000倍，這四個可能1000倍的會出現(xiàn)很鋒利的單條降解帶。而且，我覺得剛果紅里面有沒有必要加乙醇，我沒加，也是能做得出來的。我不能給你看圖片，因為我只不過是做過一次，而且那不是我學位論文的內容。 |
13樓2014-01-07 22:42:08
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