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[求助]
堿性蛋白Native-PAGE
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| 現(xiàn)在老板讓做蛋白的Native-PAGE，但是我們實驗室之前沒有人做這個，查資料又有好多地方不明白，不知道哪位大俠有這方面的經(jīng)驗，傳授一下 |
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native gel 顧名思義就是蛋白在膠上的遷移率除了受到分子量的影響還受到蛋白結(jié)構(gòu)的影響。在配置蛋白ｎａｔｉｖｅ�。纾澹斓臅r候講所有ｂｕｆｆｅｒ中的ＳＤＳ去除，且電泳液中也不能有ＳＤＳ，其次是蛋白ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ 中也不能有ＳＤＳ，且上樣之前不需要經(jīng)過蒸煮變性步驟。最后電泳過程中稍注意一下電泳溫度（一般建議冰浴跑）。 祝好你好運 |
2樓2013-05-14 10:14:07
cicelyzh
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3樓2013-05-15 08:32:40
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5樓2013-05-26 01:39:03
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵積極交流 2013-05-28 08:24:38
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你做的酸性非變性膠是一種方法。就是注意要把電極反向連接。因為蛋白是帶正電荷的，所以會向負(fù)極跑。 配方如下： 1. 分離膠：0.06M KOH，0.376M Ac，pH4.3（7.7%，丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺=37.5:1 ） 2. stacking膠：0.06M KOH，0.063M Ac，pH6.8（3.125%，丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺=3:1） 3. 電泳緩沖液：0.14M 2-丙氨酸，0.35M Ac，pH4.5 如果你要做的蛋白形成多聚體或者是分子量比較大，可以試試BN-PAGE。 |
8樓2013-05-26 14:50:33
9樓2013-05-26 15:48:06
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