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[求助]
堿性蛋白Native-PAGE
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| 現(xiàn)在老板讓做蛋白的Native-PAGE，但是我們實(shí)驗(yàn)室之前沒有人做這個(gè)，查資料又有好多地方不明白，不知道哪位大俠有這方面的經(jīng)驗(yàn)，傳授一下 |
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4樓2013-05-25 15:37:41
stevenshi021
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【答案】應(yīng)助回帖
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native gel 顧名思義就是蛋白在膠上的遷移率除了受到分子量的影響還受到蛋白結(jié)構(gòu)的影響。在配置蛋白ｎａｔｉｖｅ ｇｅｌ的時(shí)候講所有ｂｕｆｆｅｒ中的ＳＤＳ去除，且電泳液中也不能有ＳＤＳ，其次是蛋白ｌｏａｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒ 中也不能有ＳＤＳ，且上樣之前不需要經(jīng)過蒸煮變性步驟。最后電泳過程中稍注意一下電泳溫度（一般建議冰浴跑）。 祝好你好運(yùn) |
2樓2013-05-14 10:14:07
cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-05-25 21:50:05
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| 你的蛋白的等電點(diǎn)是多少？普通的native-PAGE的樣品、buffer里沒有SDS，所以只能靠本身蛋白所帶電荷跑，如果是堿性蛋白的話很可能根本不向正極跑。你需要跑在負(fù)極電泳緩沖液/樣品中引入一些負(fù)電荷，比方說blue-native PAGE、hrCN-PAGE、Deriphat-PAGE。 |
3樓2013-05-15 08:32:40
cicelyzh
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5樓2013-05-26 01:39:03
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