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baronwhy木蟲 (小有名氣)
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[求助]
新人求助關(guān)于基因共表達(dá)的一個(gè)問題！ 已有1人參與
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現(xiàn)在準(zhǔn)備做基因的共表達(dá)，查文獻(xiàn)看到的共表達(dá)分兩類，一類是多順反子表達(dá)系統(tǒng)，另一類是雙質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)。多順反子表達(dá)系統(tǒng)包括多啟動(dòng)子表達(dá)系統(tǒng)和單啟動(dòng)子表達(dá)系統(tǒng)，我準(zhǔn)備做單啟動(dòng)子的共表達(dá)。 問題是文獻(xiàn)所查的基因共表達(dá)基本都是融合表達(dá)，就是前一個(gè)基因產(chǎn)物和后一個(gè)基因產(chǎn)物間通過連接肽連接。而我不想進(jìn)行融合表達(dá)，我的設(shè)想是在兩個(gè)結(jié)構(gòu)基因均保留起始密碼子和終止密碼子，而兩基因間的連接序列含有RBS，序列結(jié)構(gòu)如下： ATG-基因1-終止密碼子1-RBS2-ATG-基因2-終止密碼子2 這樣插入表達(dá)載體后，基因1為正常表達(dá)，至終止密碼子1結(jié)束，而基因2的表達(dá)由RBS2處結(jié)合核糖體開始翻譯。 不知這種設(shè)計(jì)行不行？因?yàn)闆]有查到有這么表達(dá)方式的文獻(xiàn)！ 不知道是不是這個(gè)問題原因太簡單了，所以沒有提到，我查了好久沒查到原因  |
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2樓2014-01-09 09:41:46
WilliamHJ
金蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
baronwhy: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-15 08:56:13
baronwhy: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-06-15 08:56:13
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你的設(shè)計(jì)從理論上是可行的，不過第二個(gè)RBS位點(diǎn)的效率可能會(huì)受到影響，翻譯效率并不高。另外如果基因過長的話，轉(zhuǎn)錄過程中也難免有轉(zhuǎn)錄殘缺的情況發(fā)生，就是后面的片段沒有完全轉(zhuǎn)錄，這樣也會(huì)導(dǎo)致第二個(gè)基因的表達(dá)效率比較低。具體情況請(qǐng)參考http://www.gaoyang168.com/html/201308/6287731.html 這個(gè)帖子里有位仁兄回答比較仔細(xì)，也提供了幾篇參考文獻(xiàn) |
3樓2015-06-14 19:52:08
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