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海之韻-哈哈銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
鎳柱純化His標(biāo)簽蛋白，洗脫不下來 已有4人參與
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鎳柱純化帶有組氨酸標(biāo)簽的蛋白，用了各種濃度的咪唑進(jìn)行洗脫還是洗脫不下來，蛋白還是掛在柱子上，怎么辦啊，感覺看不到希望了，希望大家?guī)臀曳治鲆幌�，發(fā)不了文章就畢不了業(yè)啦。好郁悶啊 由于蛋白表達(dá)量少所以選擇將酶液多次上柱，洗脫液是由50mM pH7.5的PBS配制，氯化鈉濃度為400mM 1:10mM咪唑洗脫；2:15mM咪唑洗脫；3:20mM咪唑洗脫；4:50mM咪唑洗脫；5:500微升200mM咪唑洗脫；6:1毫升500mM咪唑洗脫；7:1毫升1000mM咪唑洗脫；8:最后離心剩下的resin；從第8泳道可以看出大部分蛋白還是掛在柱子上的。純化后要得到有活性的蛋白，計(jì)算回收率。如果在升高咪唑濃度怕高濃度咪唑會(huì)影響到酶的活性。但是現(xiàn)在的回收率太低了，怎樣才能提高純化效率啊？ 圖片1.jpg |
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海之韻-哈哈
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