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[求助] RT-PCR （SYBER GREEN 染料法）內(nèi)參CT值偏低已有2人參與

本人在做熒光定量PCR，選取16srRNA作為內(nèi)參，定量該株細(xì)菌某個(gè)次生代謝產(chǎn)物的基因表達(dá)量。
結(jié)果，內(nèi)參的CT值很低，在5-15之間，大部分處理都是在10以下，而此生代謝產(chǎn)物那個(gè)基因的CT值在15-25之間。這種情況正常么？
請(qǐng)各位路過的大神指教啊~！不甚感激�。�！

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1樓 2014-01-06 14:43:32

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cicelyzh

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說明目標(biāo)基因的表達(dá)量比內(nèi)參低很多。只要CT值落在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的線性范圍，應(yīng)該可以用，否則需要稀釋模板。

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2樓2014-01-06 15:05:43

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-06 15:05:43
說明目標(biāo)基因的表達(dá)量比內(nèi)參低很多。只要CT值落在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的線性范圍，應(yīng)該可以用，否則需要稀釋模板。

那如果要稀釋模板的話，目的基因的CT值會(huì)更高，或者出現(xiàn)無(wú)信號(hào)的情況怎么辦？

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3樓2014-01-06 15:13:17

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shiliyusly

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dong_yue: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-01-09 12:43:53

建議換內(nèi)參基因，選取和目的基因CT值相近的基因

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4樓2014-01-06 18:59:59

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引用回帖:

3樓: Originally posted by dong_yue at 2014-01-06 15:13:17
那如果要稀釋模板的話，目的基因的CT值會(huì)更高，或者出現(xiàn)無(wú)信號(hào)的情況怎么辦？...

1. 換與目標(biāo)基因表達(dá)相差不多的內(nèi)參
2. 只稀釋內(nèi)參的模板，不稀釋目標(biāo)基因的模板

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5樓2014-01-07 00:48:40

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同樣請(qǐng)教個(gè)問題，如果我做的是相對(duì)定量，沒有標(biāo)準(zhǔn)曲線，那內(nèi)參基因的CT值在14，目標(biāo)基因的CT值在25這樣的結(jié)果能用嗎

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6樓2014-06-05 08:41:57

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5樓: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-07 00:48:40
1. 換與目標(biāo)基因表達(dá)相差不多的內(nèi)參
2. 只稀釋內(nèi)參的模板，不稀釋目標(biāo)基因的模板...

請(qǐng)問下可以只稀釋內(nèi)參基因的模板嗎

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7樓2015-08-31 21:31:17

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內(nèi)參基因和目的基因的稀釋倍數(shù)不一樣的話做的qPCR的結(jié)果可信嗎？

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8樓2018-12-13 16:52:17

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