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請問pcr產(chǎn)物約為450bp的大小，可以用來做 real time RT-PCR嗎？ 已有1人參與
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如題，我現(xiàn)在設(shè)計的引物所能擴增出來的產(chǎn)物只有400多bp的專一性最好，擴增效率也非常理想，所以我想用這對引物做real time pcr， 可以嗎？我也試過了設(shè)計其他引物來擴增100到200bp左右的產(chǎn)物，但是都不適合做real time pcr. 急，求回復(fù)。感謝有經(jīng)驗的高手解答疑惑！ |
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cicelyzh
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還有一個問題想要請教一下 一直在困惑我 我在提取RNA想要做逆轉(zhuǎn)錄之后半定量，事實上實驗室條件有限 RNA很多時候都有降解，我打算用16s作為內(nèi)參，在做半定量的額時候沒問題吧？目的RNA降解，16S也跟著降解 但是老師說解效率不一樣，因為RNA酶水解是隨機的，那么片段越長的RNA其水解幾率越大，同時不同批次樣品提取的目的RNA和16S降解情況也不一樣，所以最好是不要降解的，（但是我們實驗室做的RNA都有不同程度的降解）我在想即使每一批的內(nèi)參和目的片段水解的效率不一致，但是對于同一批的樣品來說他們也是按照一定的長度比例來被水解的，所以只要內(nèi)參被我們固定了，按照比例那么目的片段就被我們固定了，那么即使降解的厲害，但是也是應(yīng)該可以做半定量以及定量的。RNA的完整性不需要太好，目的基因能擴出來就行，能半定量就行，不知道這個想法對不對 因為關(guān)系到我后面的實驗方案是否要改 感激不盡 謝謝 |
8樓2013-12-30 10:11:49
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10樓2013-12-30 14:20:43
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