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wybiology

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[求助] 請(qǐng)問(wèn)pcr產(chǎn)物約為450bp的大小，可以用來(lái)做 real time RT-PCR嗎？已有1人參與

如題，我現(xiàn)在設(shè)計(jì)的引物所能擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物只有400多bp的專(zhuān)一性最好，擴(kuò)增效率也非常理想，所以我想用這對(duì)引物做real time pcr，可以嗎？我也試過(guò)了設(shè)計(jì)其他引物來(lái)擴(kuò)增100到200bp左右的產(chǎn)物，但是都不適合做real time pcr.
急，求回復(fù)。感謝有經(jīng)驗(yàn)的高手解答疑惑！

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1樓 2013-12-26 10:03:26

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冷雁孤旅

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2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:04:40
可以，不要超過(guò)500bp，注意內(nèi)參擴(kuò)增片段大小要和目的基因片段基本一樣大。

請(qǐng)問(wèn)一下為什么內(nèi)參需要和目的基因一樣大是因?yàn)閿U(kuò)增時(shí)間的原因么

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生命不息奮斗不止

3樓2013-12-26 19:18:29

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cicelyzh

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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:00:35

可以，不要超過(guò)500bp，注意內(nèi)參擴(kuò)增片段大小要和目的基因片段基本一樣大。

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2樓2013-12-26 11:04:40

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cicelyzh

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3樓: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-26 19:18:29
請(qǐng)問(wèn)一下為什么內(nèi)參需要和目的基因一樣大是因?yàn)閿U(kuò)增時(shí)間的原因么...

不是的。因?yàn)閿U(kuò)增片段的長(zhǎng)短的差異會(huì)影響逆轉(zhuǎn)錄時(shí)的效率。同一PCR程序擴(kuò)增不同大小的片段也會(huì)稍有差別。

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4樓2013-12-27 08:05:34

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4樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-27 08:05:34
不是的。因?yàn)閿U(kuò)增片段的長(zhǎng)短的差異會(huì)影響逆轉(zhuǎn)錄時(shí)的效率。同一PCR程序擴(kuò)增不同大小的片段也會(huì)稍有差別。...

哦謝謝

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生命不息奮斗不止

5樓2013-12-27 14:32:31

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