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請(qǐng)問pcr產(chǎn)物約為450bp的大小，可以用來做 real time RT-PCR嗎？ 已有1人參與
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如題，我現(xiàn)在設(shè)計(jì)的引物所能擴(kuò)增出來的產(chǎn)物只有400多bp的專一性最好，擴(kuò)增效率也非常理想，所以我想用這對(duì)引物做real time pcr， 可以嗎？我也試過了設(shè)計(jì)其他引物來擴(kuò)增100到200bp左右的產(chǎn)物，但是都不適合做real time pcr. 急，求回復(fù)。感謝有經(jīng)驗(yàn)的高手解答疑惑！ |
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7樓2013-12-29 16:10:14
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還有一個(gè)問題想要請(qǐng)教一下 一直在困惑我 我在提取RNA想要做逆轉(zhuǎn)錄之后半定量，事實(shí)上實(shí)驗(yàn)室條件有限 RNA很多時(shí)候都有降解，我打算用16s作為內(nèi)參，在做半定量的額時(shí)候沒問題吧？目的RNA降解，16S也跟著降解 但是老師說解效率不一樣，因?yàn)镽NA酶水解是隨機(jī)的，那么片段越長(zhǎng)的RNA其水解幾率越大，同時(shí)不同批次樣品提取的目的RNA和16S降解情況也不一樣，所以最好是不要降解的，（但是我們實(shí)驗(yàn)室做的RNA都有不同程度的降解）我在想即使每一批的內(nèi)參和目的片段水解的效率不一致，但是對(duì)于同一批的樣品來說他們也是按照一定的長(zhǎng)度比例來被水解的，所以只要內(nèi)參被我們固定了，按照比例那么目的片段就被我們固定了，那么即使降解的厲害，但是也是應(yīng)該可以做半定量以及定量的。RNA的完整性不需要太好，目的基因能擴(kuò)出來就行，能半定量就行，不知道這個(gè)想法對(duì)不對(duì) 因?yàn)殛P(guān)系到我后面的實(shí)驗(yàn)方案是否要改 感激不盡 謝謝 |
8樓2013-12-30 10:11:49
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10樓2013-12-30 14:20:43
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