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冷雁孤旅木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于細(xì)菌RNA德 提取
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最近在做細(xì)菌RNA提取,使用trizol法,提取細(xì)菌的總RNA,降解厲害,想從內(nèi)源性酶著手來(lái)降低RNA的降解,說(shuō)明書要求每5×10^6個(gè)細(xì)胞加1 ml的trizol, 我為了提高RNA的總量,我在每10^10個(gè)細(xì)胞中加入1.5ml的trizol,請(qǐng)問(wèn)大家1. trizol過(guò)少,會(huì)不會(huì)導(dǎo)致其對(duì)于酶的抑制抑制作用不夠,使得RNA大量降解,反而使得RNA質(zhì)量不高? 2.還有就是聽?zhēng)熜终f(shuō),加入trizol不用按照說(shuō)明書上的要求來(lái)做,把細(xì)胞濃度提高一些,但是這個(gè)濃度的上限是多少? 3.諸位,一般是多少的細(xì)菌加入1ml 的trizol 合適? ![]() 4.在吸取上清液的時(shí)候,一般是吸多少合適?(我一般是吸上清總量的2/3左右,是不是太多了,我盡可能不吸到蛋白沉淀)但是在離心沉淀后,說(shuō)明書上說(shuō)可以看到RNA沉淀,事實(shí)上我看到了白色的沉淀,查閱資料后有人說(shuō)那是蛋白質(zhì)的沉淀,以及多糖還有RNA的復(fù)合物,純凈的RNA在離心的時(shí)候是否能看到沉淀? 非常感謝諸位了。 |

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