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lxyzsx

新蟲 (初入文壇)

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[求助] 重組質(zhì)粒雙酶切已有6人參與

本人最近構(gòu)建真核表達(dá)載體，提取重組質(zhì)粒pcr有目的條帶，而雙酶切沒有目的條帶。為了檢驗(yàn)酶活，分別單酶切，全都切開。各位大神，遇到這種情況是不是pcr出現(xiàn)假陽性了？我決定拿出去測序，如果測序結(jié)果正確，那怎么會出現(xiàn)雙酶切切不出目的條帶呢？

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[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:54 ]

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1樓 2014-01-16 19:33:30

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zhaozhibozhi

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-02-18 11:49:44

可能雙酶切效率非常低，建議更換buffer，或分步酶切

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做一個陽光、開朗的小和尚

4樓2014-01-16 21:42:28

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lvbobo823

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【答案】應(yīng)助回帖

★
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gyesang: 金幣+1, 鼓勵交流！ 2014-01-16 21:28:22

可能出現(xiàn)污染了，測序結(jié)果對的話肯定能切開。

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hehe

2樓2014-01-16 20:23:26

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月季花yrg

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵交流！ 2014-01-16 21:28:32

測序正確的話肯定不是假陽性了，可能是一些特殊結(jié)構(gòu)保護(hù)了酶切位點(diǎn)，就是切不開，可以直接用，但保險起見，建議重新?lián)Q酶切位點(diǎn)沖構(gòu)載體

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3樓2014-01-16 21:24:04

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永遠(yuǎn)一片天

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-02-18 11:49:47

很有可能，您的兩個酶切位點(diǎn)離得太近，保護(hù)堿基不足，會出現(xiàn)這種情況的。離得太近，會有位阻影響，需要進(jìn)行兩次單酶切。

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5樓2014-02-17 21:08:19

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