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glfcpu銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于用某種離子交換純化蛋白時(shí)，如何測(cè)定該蛋白的動(dòng)態(tài)載樣量？ 已有4人參與
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關(guān)于這個(gè)問(wèn)題自己查了很多資料，比較主流的說(shuō)法是——“將待純化的原始料液（不是純蛋白），不停的進(jìn)行上樣，每管進(jìn)行穿透收集，進(jìn)行測(cè)定目標(biāo)蛋白濃度，當(dāng)穿透中的目標(biāo)蛋白濃度為原始料液濃度的10%時(shí)就是10%穿透的載量。" 小蟲在此提出兩個(gè)問(wèn)題，請(qǐng)各位同行探討并指點(diǎn)： 1）關(guān)于這里的原始料液該如何理解，因?yàn)橥ǔｋx子交換時(shí)需要調(diào)節(jié)上樣液的pH和離子強(qiáng)度，使之接近于工作液（A相），所以這里的原始料液是否指調(diào)節(jié)過(guò)后的液體（通常是稀釋液體）？ 2）上述提及的目標(biāo)蛋白濃度為原始料液濃度的10%，這個(gè)該如何準(zhǔn)確定量呢，是否可以簡(jiǎn)單理解為層析柱末端流出液的吸收值增值原始料液的紫外吸收值的10%？ |
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3樓2014-02-17 14:07:24
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2樓2014-02-16 15:19:53
glfcpu
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4樓2014-02-18 18:40:29
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對(duì)的，是比較流出液中目標(biāo)蛋白的單位活性與原料也中的單位活性的百分比，這個(gè)是最準(zhǔn)確的 至于你所說(shuō)的sds-page 或HPLC的方法，有時(shí)會(huì)用于代替上述方法，因?yàn)榛钚苑磻?yīng)的是你的直接結(jié)果，而sds-page 或HPLC的方法也不過(guò)是為了間接反映你的目標(biāo)產(chǎn)物的含量，也有直接通過(guò)紫外吸收直接判定的。 選擇哪種要看具體的操作難度，和你對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確度要求 |
5樓2014-02-20 12:10:55
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