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junmove銅蟲 (小有名氣)
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畢赤酵母表達(dá)酶發(fā)酵無活性
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歡迎高手解疑答惑： 本人將一個淀粉酶基因克隆到pPICZαA載體上的多克隆位點內(nèi)，Sac I 線性化電轉(zhuǎn)后用博萊霉素梯度（100-200ug/ml）的YPD板子篩選陽性轉(zhuǎn)化子，并將幾十個轉(zhuǎn)化子全部拿來發(fā)酵后檢測發(fā)酵液活性，在兩株菌的發(fā)酵液中檢測到了較高的淀粉酶活性，將這兩株菌保存于甘油管中置冰箱保存。然后將保存的菌活化、發(fā)酵，相同的發(fā)酵條件，卻在發(fā)酵液中再也檢測不到淀粉酶的活性。做了兩次轉(zhuǎn)化，每次都通過轉(zhuǎn)化子發(fā)酵檢測活性的方法篩選到了重組酵母菌，但用保存的菌再去發(fā)酵，就檢測不到活性了。哪位高手可以指點一二，為什么保菌后再發(fā)酵就無活性了？ 正常培養(yǎng)用的YPD, 表達(dá)培養(yǎng)基用的BMMY, 0.5%甲醇誘導(dǎo)表達(dá)。發(fā)酵用的是 50ml 離心管，發(fā)酵體積5ml。 [ Last edited by junmove on 2014-2-19 at 21:08 ] |
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2樓2015-01-23 20:39:27
junmove
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