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溶解包涵體究竟給多少濃度的DTT？ 已有1人參與
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| 一般洗滌的時候我是給1mM，溶解的時候給5mM，但是有時溶解不了。想增大DTT的濃度，又擔(dān)心會有危害。看見有的帖子文獻(xiàn)上說給1-5mM的，或者50-100mM的都有。不禁疑惑了，究竟DTT可以給多大的濃度呢？ |
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imyting
至尊木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xissy: 金幣+4, ★★★很有幫助 2014-03-04 12:29:45
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xissy: 金幣+4, ★★★很有幫助 2014-03-04 12:29:45
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其一，若想溶解包涵體，只加DTT是不夠的，要輔助尿素才可以； 其二，要想破壞二硫鍵的話，DTT的摩爾量要是蛋白中二硫鍵的100倍左右，如果是保護(hù)-SH的話，5-10倍就好了； 其三，你說的過量對蛋白的傷害我不太明白，因?yàn)槟愕牡鞍滓呀?jīng)是包涵體了，就算溶解了暫時也不會正確折疊的；如果是你覺得會修飾肽鏈或者打斷肽鏈的話，那你的擔(dān)心是多余的；所以，我覺得不會存在過量傷害蛋白的問題。 |
4樓2014-03-03 15:09:11
imyting
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2樓2014-03-03 11:54:38
3樓2014-03-03 14:14:46
5樓2014-03-04 12:29:55
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