 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (3912)
- >考研 (969)
- >導(dǎo)師招生 (810)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (247)
- >文獻(xiàn)求助 (136)
- >休閑灌水 (95)
- >碩博家園 (81)
- >招聘信息布告欄 (46)
- >考博 (45)
- >博后之家 (30)
- >綠色求助(高懸賞) (29)
- >基金申請(qǐng) (24)
- >論文投稿 (20)
- >外文書(shū)籍求助 (9)
- >教師之家 (9)
- >攻關(guān)文獻(xiàn)(高獎(jiǎng)勵(lì)) (8)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1817 | 回復(fù): 7 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
lixg鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
關(guān)于載體改造 已有2人參與
|
|
|
我要進(jìn)行載體改造，將載體A中的一個(gè)片段切下來(lái)，裝到載體B中。由于酶切位點(diǎn)不很合適，只能做如下平末端連接。擬定下列操作，請(qǐng)高手看看合適不？如不合適，如何改進(jìn)？ 1. 將載體A用AscI和SpeI酶切，乙醇沉淀，ddH2O回溶，用T4 DNA polymerase末端補(bǔ)平，電泳，切膠，回收純化約目的片段。 2. 將載體B用BamHI酶切（位于多克隆位點(diǎn)內(nèi)），乙醇沉淀，ddH2O回溶，用T4 DNA polymerase末端削平，過(guò)柱子純化、去磷酸化。 3. 將上述1.2所得產(chǎn)物連接，轉(zhuǎn)化。 主要請(qǐng)高手們參謀參謀第一步和第二步是否合適。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有82人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學(xué) 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于雙元載體pCAMBIA1300的問(wèn)題,高手解答一下
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 投一篇關(guān)于藥物載體的文章
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 關(guān)于使載體平末端環(huán)化的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 載體改性是什么意思啊？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于T載體連接驗(yàn)證后測(cè)序不對(duì)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 有誰(shuí)改造過(guò)pPIC9K載體嗎（用GAP替換AOX1啟動(dòng)子）且成功的嗎
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 二氧化鋯改性氧化鋁載體
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 關(guān)于ZrO2載體的購(gòu)買(mǎi)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 關(guān)于分子篩載體孔徑的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于SiRNA表達(dá)載體構(gòu)建的問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 關(guān)于pet28克隆載體
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】擬改造一個(gè)表達(dá)載體，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鱿氯绾芜M(jìn)行
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于T載體連接問(wèn)題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】求助關(guān)于載體多克隆位點(diǎn)改造
已經(jīng)有8人回復(fù)
lvbobo823
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 363 (碩士)
- 金幣: 7753.3
- 散金: 15
- 紅花: 9
- 帖子: 751
- 在線: 189.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 819723
- 注冊(cè): 2009-07-31
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 植物遺傳學(xué)
3樓2014-03-08 21:26:53
Lau_Kimura
鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 41 (小學(xué)生)
- 金幣: 20.5
- 散金: 189
- 紅花: 19
- 帖子: 320
- 在線: 119.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2468570
- 注冊(cè): 2013-05-17
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 作物分子育種
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-08 22:02:08
lixg: 金幣+5, ★★★很有幫助, 嗯，按照我的方案如果做不出來(lái)，就用你的方案做一下。畢竟平端不好連。非常感謝！ 2014-03-09 09:55:09
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-08 22:02:08
lixg: 金幣+5, ★★★很有幫助, 嗯，按照我的方案如果做不出來(lái)，就用你的方案做一下。畢竟平端不好連。非常感謝！ 2014-03-09 09:55:09
|
通過(guò)PCR克隆，把載體A的那個(gè)片段切下來(lái)。這個(gè)方案不行？ 1、設(shè)計(jì)引物，5‘端添加所需的酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基。 2、PCR擴(kuò)增（載體A為模版），產(chǎn)物純化、酶切回收目的片段。 3、載體B酶切回收目的片段。 4、上述2、3的目的片段連接，轉(zhuǎn)化，搖菌。 5、菌落PCR和酶切驗(yàn)證大小后，送測(cè)序，看是否有載體A是否有PCR導(dǎo)致的堿基突變。 注：9kb全基因的互補(bǔ)載體，我們也是引物新增酶切位點(diǎn)分為一段段地構(gòu)建好，再連接在一起的。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
lixg2樓2014-03-08 20:40:43
lixg
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 61 (初中生)
- 金幣: 7627.1
- 散金: 1
- 紅花: 7
- 帖子: 591
- 在線: 106.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 859417
- 注冊(cè): 2009-09-29
- 專(zhuān)業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
4樓2014-03-09 09:58:36
|
可以試試這篇論文的方法，雖然是個(gè)小的改進(jìn)，但是值得一試，而且很方便： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 |
5樓2014-03-25 18:10:02
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[基金申請(qǐng)]
請(qǐng)問(wèn)共同通訊和共同一作的認(rèn)可度問(wèn)題
 30+3
|
psa1234 2026-04-01 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 一志愿哈工大 材料與化工 +30 | 洛神哥哥 2026-03-31 | 30/1500 |
|
|
[考研] 土木304求調(diào)劑 +6 | 兔突突突， 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北交大材料工程，總分358 +4 | cs0106 2026-04-01 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程專(zhuān)碩324分，一志愿中國(guó)礦業(yè)大學(xué)求調(diào)劑 +7 | 耿耿1314 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)324求調(diào)劑 +12 | hanamiko 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 270求調(diào)劑 +7 | 小杰pp 2026-03-31 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 379求調(diào)劑 +3 | ?苦瓜不苦 2026-04-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 303分 0807學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | TYC3632 2026-04-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +8 | 三水sss 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料工程085601數(shù)二英一335求調(diào)劑 +5 | 雙馬尾痞老板2 2026-03-31 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿a區(qū)211，085601-307分求調(diào)劑 +10 | 黨嘉豪 2026-03-31 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)354求調(diào)劑 +15 | 101次希望 2026-03-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料工程專(zhuān)碩求調(diào)劑 +10 | hyl3153942 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +6 | Ong3 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料相關(guān)專(zhuān)業(yè)調(diào)劑 +10 | 哇呼哼呼哼 2026-03-30 | 12/600 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+5
|
鐘llll 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[有機(jī)交流] 考研調(diào)劑 +8 | watb 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 末未mm 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +10 | 大饞小子 2026-03-28 | 10/500 |
|