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pser2011銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
一個(gè)基因做TA克隆后送去測序，不同的單克隆后來結(jié)果不一致，1500bp里有的11個(gè)堿基不同 已有5人參與
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金唯智公司測的�；蛐蛄形粗�，這可用那個(gè)構(gòu)建表達(dá)載體呀，大神有知道解決辦法的，救命��！ 看了氨基酸的序列，多數(shù)單克隆間氨基酸序列一致，這樣的話隨便挑一個(gè)單克隆做還是有什么挑選的規(guī)則？ [ Last edited by pser2011 on 2014-3-10 at 21:26 ] |
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2007090351
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9樓2014-10-11 14:54:51
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2樓2014-03-10 22:23:45
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3樓2014-03-11 10:51:46
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
pser2011(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-03-16 14:42:52
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pser2011(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-03-16 14:42:52
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1.對(duì)于這種情況，首先看一下測序的峰圖，確定是否是單峰，是不是背景雜峰比較多，測序公司會(huì)把背景雜峰較高的反應(yīng)也算作成功反應(yīng)的。 2.將測序結(jié)果翻譯成蛋白質(zhì)序列，到NCBI的數(shù)據(jù)庫中去blast，然后看是否有完全一致的比對(duì)結(jié)果，選擇有完全一致比對(duì)結(jié)果的序列進(jìn)行后續(xù)克隆 一般來說，Taq聚合酶的突變率不會(huì)有這么高，1500bp有1到2個(gè)克隆算是正常。出現(xiàn)多個(gè)測序結(jié)果的情況，可能是由于測序結(jié)果不好（雜峰導(dǎo)致序列差異），或者是模板不純（混有多個(gè)基因組等），PCR的退火溫度太低(45-50度)。 如果可能的話，可以使用Pfu等高保真的酶再做一下 |
4樓2014-03-11 11:00:49
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