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燕歸來0101銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)菌的RT-PCR求助 已有2人參與
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| 大家好，我想用熒光定量PCR對(duì)某種細(xì)菌進(jìn)行定量，現(xiàn)在有該細(xì)菌基因組上的一段DNA序列（600bp）,和一對(duì)能擴(kuò)增出這段序列中156bp片段的特異性引物，由于之前沒接觸過RT-PCR，想請(qǐng)教大家該如何進(jìn)行，怎樣才能對(duì)我的細(xì)菌進(jìn)行定量？需要購買哪些什么試劑、試劑盒的？RT-PCR儀器學(xué)院里有。 |
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若溪
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燕歸來0101: 金幣+9, ★有幫助 2014-03-14 12:02:21
| 樓主對(duì)細(xì)菌進(jìn)行定量，很少有用熒光定量的啊，一般流式細(xì)胞儀就可以，以前見過文獻(xiàn)對(duì)病毒進(jìn)行絕對(duì)定量的，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行定量還是第一次。RT-PCR用普通的PCR儀器就可進(jìn)行，不難，但是需要RT-PCR試劑盒。 |
3樓2014-03-13 10:11:21
lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 試劑一般用SYBR Green（Roche，TAKARA），耗材需要專門的耗材跟儀器相關(guān)，你需要設(shè)計(jì)定量引物一般用軟件設(shè)計(jì)要求較高，引物需要先得到擴(kuò)增效率。選擇好的擴(kuò)增效率的引物再進(jìn)行定量。網(wǎng)上有很多關(guān)于定量的文件你可以看看。 |
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燕歸來01012樓2014-03-12 21:41:56
燕歸來0101
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4樓2014-03-13 16:52:30
燕歸來0101
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5樓2014-03-13 16:55:11
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