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963979587銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA純度是否會影響RT-PCR的結果 已有4人參與
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| 各位蟲友們,大家好,我提取的RNA,OD260/OD230都小于1可以用來做RT-PCR嗎?影響大不大? |
木蟲 (小有名氣)
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鐵桿木蟲 (正式寫手)

銀蟲 (初入文壇)
銀蟲 (初入文壇)
銀蟲 (初入文壇)
金蟲 (正式寫手)
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個人經(jīng)驗,260/230偏小的話,那就是提取的時候有機試劑有殘留,提取時可以改進以下幾點: 1.加氯仿抽提后取少一點上清,不要貪多。 2.加乙醇洗的時候,多晃幾次,盡量讓RNA沉淀整片懸浮起來(有時候確實浮不起來也沒辦法。) 3.棄乙醇的時候,用槍吸而不是傾倒,倒的話經(jīng)常有液滴留在管壁上,倒不干凈。第一次用藍槍頭吸,可以不完全吸干,免得吸到沉淀;然后短暫離心把殘余酒精甩到管底,看準了用白槍頭盡量吸干凈。RNA量大,被白槍頭弄掉一點也沒關系。 4.溶解前晾干的時間可以長一點,5分鐘也沒關系的。標準的做法說是不能晾太久,等沉淀開始變透明就要加水溶解,但是我晾過10分鐘的,后面RNA量也很大?赡芰看,雖然有些溶解不了,最后濃度還是高。 |

銀蟲 (初入文壇)
用戶注銷 (正式寫手)
Thomas_HT
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