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963979587銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
RNA純度是否會影響RT-PCR的結(jié)果 已有4人參與
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| 各位蟲友們，大家好，我提取的RNA,OD260/OD230都小于1可以用來做RT-PCR嗎？影響大不大？ |
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朱多龍
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2樓2014-03-14 21:56:26
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3樓2014-03-15 01:20:09
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4樓2014-03-15 08:14:50
963979587
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5樓2014-03-16 21:33:31
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6樓2014-03-16 21:34:15
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7樓2014-03-16 21:35:00
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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個人經(jīng)驗，260/230偏小的話，那就是提取的時候有機試劑有殘留，提取時可以改進以下幾點： 1.加氯仿抽提后取少一點上清，不要貪多。 2.加乙醇洗的時候，多晃幾次，盡量讓RNA沉淀整片懸浮起來（有時候確實浮不起來也沒辦法。） 3.棄乙醇的時候，用槍吸而不是傾倒，倒的話經(jīng)常有液滴留在管壁上，倒不干凈。第一次用藍槍頭吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暫離心把殘余酒精甩到管底，看準了用白槍頭盡量吸干凈。RNA量大，被白槍頭弄掉一點也沒關(guān)系。 4.溶解前晾干的時間可以長一點，5分鐘也沒關(guān)系的。標準的做法說是不能晾太久，等沉淀開始變透明就要加水溶解，但是我晾過10分鐘的，后面RNA量也很大�？赡芰看螅m然有些溶解不了，最后濃度還是高。 |
8樓2014-03-17 09:12:37
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9樓2014-03-23 20:51:31
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10樓2014-08-20 14:49:33
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