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菜菜0929木蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎樣獲得反向序列 已有2人參與
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| 我的電腦裝不上primer5，裝了一個(gè)primer6，但是primer6粘貼序列的時(shí)候，沒(méi)有反向、方向互補(bǔ)的選項(xiàng)，請(qǐng)教primer6上怎么得到反向序列？或者其他軟件也行，只是除了primer5 |
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Lau_Kimura
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-03-17 10:26:18
菜菜0929: 金幣+2, 謝謝 2014-03-17 14:21:44
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關(guān)于普通PCR的引物設(shè)計(jì)，老板總會(huì)說(shuō)：你要知道，你比軟件聰明多了。還用什么設(shè)計(jì)軟件？ 在目標(biāo)區(qū)域的側(cè)翼序列觀察剪輯分布均勻的18-25bp小片段，注意引物之內(nèi)和之間不能有連續(xù)4個(gè)堿基互補(bǔ)，3‘端不能連續(xù)3個(gè)堿基互補(bǔ)，最后一個(gè)堿基最好不是A；然后，將引物用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)Blast，查看引物特異性，引物3‘端不斷移動(dòng)，直至尋找到特異性的引物為止。但反向序列要反轉(zhuǎn)，可選用DNAMAN，DNAStar輔助，眼疾手快的也可自行手寫，20多bp而已。 PS：引物合成也不值幾個(gè)錢了，即使一時(shí)半會(huì)不行，多實(shí)踐幾次就上手了。 |
2樓2014-03-16 18:51:54
菜菜0929
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3樓2014-03-16 19:15:34
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4樓2014-03-16 19:35:15
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5樓2014-03-16 19:39:53
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8樓2014-03-17 14:20:51
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9樓2017-01-07 15:24:56
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