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[求助]
細菌超聲破碎之后，破碎液中的酶沒有活性。 已有5人參與
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| 我的菌在全細胞的時候，對我的底物是可以轉(zhuǎn)化的，但是細菌超聲破碎之后，對破碎液中的酶就行酶活測試，卻發(fā)現(xiàn)對我的底物沒有任何轉(zhuǎn)化效果，這究竟是什么原因呢？我是直接在破碎液中就行酶活測試的，即用破碎液做參比，在離過心的稀釋了一定倍數(shù)的破碎液中加入我的底物，然后在紫外進行全波段掃描，在20min內(nèi)吸收曲線沒有任何變化。而且如果破碎液不進行稀釋的話，壓根就沒有吸收峰出現(xiàn)，這到底是什么原因？？？請教下大家~~ |
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g8339569
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4樓2014-03-19 21:43:45
zhuzhaoyang
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【答案】應(yīng)助回帖
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你這問題復(fù)雜了，有幾方面的原因要考慮： 1、超聲破碎的時候酶有沒有失活？超聲破碎一般要冰浴的，并且選擇合適的超聲功率和超聲工作時間間歇時間和工作總時間，這個要通過實驗驗證； 2、超聲破胞液一般懸浮物含量很多，透光率很低的，不能直接進行紫外測定，要通過一定的稀釋，一般我都是進行100-1000倍的稀釋，測酶活的時候稀釋后的破胞酶液一般在5ml的反應(yīng)體系里面加入100ul，這樣不至于懸浮物影響紫外光的透過，直接用破胞液肯定是不行的； 3、比色皿要注意用石英的，玻璃的是不行的，注意比色皿的清潔度； 4、你確定你的底物和產(chǎn)物是在紫外波段的吸收嗎？ |
2樓2014-03-19 18:29:10
3樓2014-03-19 21:31:59
5樓2014-03-20 09:43:20
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