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夏天的普洱茶木蟲 (著名寫手)
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[求助]
擴全長選walking還是RACE? 已有2人參與
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| 最近根據(jù)N端保守區(qū)和中間一個保守區(qū)域擴增出一個大約700bp的片段，比對后發(fā)現(xiàn)是我要的酶，現(xiàn)在想擴增全長，查了些資料后，不知道該選哪個方法，請蟲友們給個建議。我的菌是細菌，現(xiàn)在知道5‘端的700個堿基，具體全序列有多長還不知道，查了些資料說可以用genome walking或者race，這兩種選哪一個比較好呢？ |
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gyesang
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由于你是原核的，所以獲得cDNA的全長序列和基因所在的全長基因組序列是一樣的 你這個問題的本質就是你需要擴增你已知的700bp序列的側翼序列，即所謂的genome walking 由已知序列擴未知序列，方法有很多 常用的有iPCR，adaptor-PCR，Tail-PCR，個人經驗iPCR配合nested PCR成功率比較高 |
8樓2014-03-20 20:08:37
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6樓2014-03-20 17:06:58
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7樓2014-03-20 19:20:55
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9樓2014-03-20 21:01:54
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10樓2014-03-20 22:30:56
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