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夏天的普洱茶木蟲 (著名寫手)
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[求助]
擴(kuò)全長(zhǎng)選walking還是RACE? 已有2人參與
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| 最近根據(jù)N端保守區(qū)和中間一個(gè)保守區(qū)域擴(kuò)增出一個(gè)大約700bp的片段，比對(duì)后發(fā)現(xiàn)是我要的酶，現(xiàn)在想擴(kuò)增全長(zhǎng)，查了些資料后，不知道該選哪個(gè)方法，請(qǐng)蟲友們給個(gè)建議。我的菌是細(xì)菌，現(xiàn)在知道5‘端的700個(gè)堿基，具體全序列有多長(zhǎng)還不知道，查了些資料說(shuō)可以用genome walking或者race，這兩種選哪一個(gè)比較好呢？ |
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gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
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由于你是原核的，所以獲得cDNA的全長(zhǎng)序列和基因所在的全長(zhǎng)基因組序列是一樣的 你這個(gè)問(wèn)題的本質(zhì)就是你需要擴(kuò)增你已知的700bp序列的側(cè)翼序列，即所謂的genome walking 由已知序列擴(kuò)未知序列，方法有很多 常用的有iPCR，adaptor-PCR，Tail-PCR，個(gè)人經(jīng)驗(yàn)iPCR配合nested PCR成功率比較高 |
8樓2014-03-20 20:08:37
西門吹雪170
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2樓2014-03-20 16:30:16
夏天的普洱茶
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3樓2014-03-20 16:33:20
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4樓2014-03-20 16:50:39
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