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xhj83鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
液相條件的請(qǐng)教
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| 各位大俠，我現(xiàn)在在做兩個(gè)生物堿類的含量，我想在一個(gè)條件把兩個(gè)東西一起檢測(cè)出來，一個(gè)吸收峰在235nm，一個(gè)在267nm,報(bào)道的流動(dòng)相不同，但是都是用的不同組成和PH的鹽緩沖液，請(qǐng)教我該如何去思考我的緩沖溶液的成分，組成和PH,謝謝，提供思路。 |
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lionguy
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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“流動(dòng)相不同，但是都是用的不同組成和pH的鹽緩沖液”？ 1、若是都是磷酸鹽或者都是醋酸鹽、或許都是酸性條件，可以考慮同時(shí)檢測(cè)；但是需要在儀器上進(jìn)行流動(dòng)相條件的探索，具體做法是：配制出您可能需要的那個(gè)緩沖鹽溶液（或者幾個(gè)濃度、幾個(gè)不同pH值），利用HPLC儀器上的不同液路通道，探索多種情況不同比列得流動(dòng)相組合時(shí)，被測(cè)組分保留時(shí)間的具體情況。 2、利用二極管陣列檢測(cè)器完全可以同時(shí)設(shè)定不同檢測(cè)波長組分的檢測(cè)，但需要注意：幾個(gè)濃度、幾個(gè)不同pH值的、不同水相有機(jī)相比例的流動(dòng)相可能會(huì)引起原來檢測(cè)波長的變化，可能原來的最大吸收峰在新的流動(dòng)相條件下已經(jīng)不是最大吸收峰了，需要進(jìn)一步確證！這一點(diǎn)可以利用二極管陣列檢測(cè)器的3D檢測(cè)功能，設(shè)定一個(gè)檢測(cè)波段，例如：檢測(cè)210納米——400納米，根據(jù)所檢測(cè)出的圖譜，重新確定最佳流動(dòng)相條件和最大吸收峰位置。 3、用單組份標(biāo)準(zhǔn)溶液確定2個(gè)組分在新的色譜條件下的出峰順序，確定其具體的保留時(shí)間，因?yàn)橹挥?個(gè)組分，通�？梢钥紤]將其保留時(shí)間都在5分鐘以后，20分鐘以前，且保證分離度大于1.5；即可。 |
2樓2014-03-23 10:21:56
zheng0123
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2014-03-29 06:14:39
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4樓2014-03-29 07:10:50
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