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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 網(wǎng)絡生活區(qū) » 有獎問答 » 實驗討論 » 液相條件的請教
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xhj83鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
液相條件的請教
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| 各位大俠，我現(xiàn)在在做兩個生物堿類的含量，我想在一個條件把兩個東西一起檢測出來，一個吸收峰在235nm，一個在267nm,報道的流動相不同，但是都是用的不同組成和PH的鹽緩沖液，請教我該如何去思考我的緩沖溶液的成分，組成和PH,謝謝，提供思路。 |
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z植瓊連
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4樓2014-03-29 07:10:50
lionguy
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- 專業(yè): 色譜分析
【答案】應助回帖
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“流動相不同，但是都是用的不同組成和pH的鹽緩沖液”？ 1、若是都是磷酸鹽或者都是醋酸鹽、或許都是酸性條件，可以考慮同時檢測；但是需要在儀器上進行流動相條件的探索，具體做法是：配制出您可能需要的那個緩沖鹽溶液（或者幾個濃度、幾個不同pH值），利用HPLC儀器上的不同液路通道，探索多種情況不同比列得流動相組合時，被測組分保留時間的具體情況。 2、利用二極管陣列檢測器完全可以同時設定不同檢測波長組分的檢測，但需要注意：幾個濃度、幾個不同pH值的、不同水相有機相比例的流動相可能會引起原來檢測波長的變化，可能原來的最大吸收峰在新的流動相條件下已經(jīng)不是最大吸收峰了，需要進一步確證！這一點可以利用二極管陣列檢測器的3D檢測功能，設定一個檢測波段，例如：檢測210納米——400納米，根據(jù)所檢測出的圖譜，重新確定最佳流動相條件和最大吸收峰位置。 3、用單組份標準溶液確定2個組分在新的色譜條件下的出峰順序，確定其具體的保留時間，因為只有2個組分，通常可以考慮將其保留時間都在5分鐘以后，20分鐘以前，且保證分離度大于1.5；即可。 |
2樓2014-03-23 10:21:56
3樓2014-03-29 06:14:39
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