 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1822 | 回復(fù): 2 | ||
sky_x1227鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
液相色譜反向C18柱分離多肽 流動相的選擇問題 已有1人參與
|
大家好，我用液相色譜分離多肽，選用的是反向C18的柱子，我的蛋白是水溶性的蛋白，反向C18因其調(diào)料為非極性的鍵合相不能承受純水做流動相，咨詢下大家最常用的是選用什么樣的有機溶劑，又不對蛋白樣品有什么損傷，希望有經(jīng)驗的童鞋給些建議。越詳細越好噢~ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
323求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
352求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿東華大學(xué)化學(xué)070300，求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
317求調(diào)劑
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
280分求調(diào)劑 一志愿085802
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0854電子信息求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
263求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 液相色譜流動相
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 分離小肽片段選用什么樣的液相色譜柱？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 安捷倫C18反相色譜柱可以反過來用嗎?
已經(jīng)有27人回復(fù)
- C18反相色譜柱老化一般需色譜純跑多長時間？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 液相C18柱，柱長不同，250mm與200mm，會影響分離度嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 流動相走空了，色譜柱進空氣了怎么辦
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于高效液相流動相配比問題的
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 液相色譜流動相過濾問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 液相色譜的流動相選擇
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 色譜柱與流動相問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- Venusil XBP C18反相色譜柱，流動相選擇
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 反相C18色譜 流動相極性大 有機物出峰快？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】C18反相柱被污染，用異丙醇沖洗對嗎？請指教��！
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助】急求C18色譜柱怎么再生？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助】C18 柱流動相選擇
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【資源】液相色譜柱原理
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 討論：液相色譜柱選擇
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助】正相流動相選擇問題？~~~
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】以水為流動相的高效液相色譜方法
已經(jīng)有16人回復(fù)
zhu007liang
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 4855.7
- 帖子: 168
- 在線: 225.4小時
- 蟲號: 1296591
- 注冊: 2011-05-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 金屬有機化學(xué)
2樓2014-07-15 15:57:32
【答案】應(yīng)助回帖
|
首先應(yīng)該能與樣品溶液有很好的相溶性，且洗脫能力要比樣品的稀釋液的洗脫能力強，一般最好流動相與稀釋液一樣。 再者流動相與稀釋液不應(yīng)再樣品的紫外吸收波長處有吸收，一般有機溶劑首選乙腈，因為在1.0ml/min條件下，乙腈與水溶液混溶時壓力變化不是很大，不會影響柱子的使用壽命。再者，乙腈的紫外吸收截止波長較短（在210nm左右）。 再者就是有機溶劑的黏度了，黏度太大會增大柱壓，就黏度而言，乙腈、甲醇是首選。 流動相一般為緩沖鹽與有機相的混合液。有機溶劑中能與緩沖鹽有很好的相溶性的就數(shù)乙腈和甲醇了。 根據(jù)你的分析物質(zhì)的不同，流動相的極性的要求也不同，這時需要通過不斷地調(diào)節(jié)有機相的比例來獲得很好的分離度、出峰時間、峰形的對稱性、等等。 如果你分析的物質(zhì)是中性的分子或非解離型物質(zhì)，這時的流動相用流動相與超純水的混合液即可。如果樣品溶液中有離子的其他物質(zhì)的干擾，此時就需要調(diào)節(jié)流動相中緩沖鹽的pH了。 怎么確定你分析的物質(zhì)中存在離子或其他干擾物質(zhì)的存在呢？ 用如下辦法可以確定有無離子或干擾物質(zhì)的存在影響分析——在同樣的色譜條件下每批樣品的分析結(jié)果不能很好的重現(xiàn)，或者說分離效果不明顯。 如果是解離性的物質(zhì)，則流動相為有機相與緩沖鹽的混合液，且流動相中的緩沖鹽則必須調(diào)節(jié)pH,不然分析效果肯定不理想。一般pH與樣品主成分的pKa之差大于2，才能獲得較好的分離效果。 現(xiàn)在一般的C18色譜柱，能耐受的pH范圍是2-8，也有范圍更寬的，可以參照色譜柱說明書。所以流動相中添加磷酸、甲酸、乙酸什么的都沒有任何問題，只要pH在耐受范圍即可。但是，選擇流動相添加劑也是有講究的，比如你方法選用的波長是210nm，那么最好不要用甲酸乙酸，因為甲酸乙酸的截止波長大于210nm，會造成基線漂移嚴重；另外，如果你流動相的pH是4.0，那么不建議使用磷酸鹽，因為磷酸鹽/磷酸在pH4.0附近是沒有緩沖能力的，流動相的pH很容易發(fā)生變化，導(dǎo)致出峰重現(xiàn)性差。 |
3樓2014-07-17 22:50:54
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 sky_x1227 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +7 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +3 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | shxchem 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 機械專碩299求調(diào)劑至材料 +3 | kkcoco25 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)求調(diào)劑 +6 | hanamiko 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)求調(diào)劑 +4 | Stella_Yao 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08工學(xué)調(diào)劑 +5 | 用戶573181 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
申請回稿延期一個月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|