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buleini新蟲 (著名寫手)
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[求助]
血液中總蛋白質(zhì)濃度的測定可否采用考馬斯亮藍(lán)法， 已有1人參與
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莫莫愛沐沐
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【答案】應(yīng)助回帖
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下面是蛋白質(zhì)測定的方法：定氮法，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）。 凱氏定氮 靈敏度低，適用于0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％ 費(fèi)時(shí) 8～10小時(shí) 將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離） 用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測定；干擾少；費(fèi)時(shí)太長 雙縮脲法（Biuret法） 靈敏度低 1～20mg 中速 20~30分鐘 多肽鍵＋堿性Cu2＋®紫色絡(luò)合物 硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸 用于快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相似 紫外吸收法 較為靈敏 50～100mg 快速 5～10分鐘 蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 各種嘌吟和嘧啶； Folin－酚試劑法（Lowry法） 靈敏度高 ～5mg 慢速 40～60分鐘 雙縮脲反應(yīng)；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸； 各種硫醇 耗費(fèi)時(shí)間長；操作要嚴(yán)格計(jì)時(shí)；顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法) 靈敏度最高 1～5mg 快速5～15分鐘 考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，其lmax由465nm變?yōu)?95nm 強(qiáng)堿性緩沖液； SDS 最好的方法；干擾物質(zhì)少；顏色穩(wěn)定； 顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 |
2樓2014-04-03 19:49:44
buleini
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4樓2014-04-08 21:30:22
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