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xiangquanju金蟲 (小有名氣)
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[求助]
絕對(duì)定量PCR中標(biāo)準(zhǔn)品的疑問？ 已有4人參與
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要做一個(gè)功能基因的絕對(duì)定量，樣品有廢水，土壤，大概40多個(gè) 現(xiàn)在要做標(biāo)準(zhǔn)曲線，打算用含有目的基因的質(zhì)粒做模板，有個(gè)疑問請(qǐng)教一下大家，我是不是可以只從某一樣品中擴(kuò)增這個(gè)功能基因，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒用來做標(biāo)準(zhǔn)品！因?yàn)榭紤]到不同物種之間基因序列也有微小的差別，這種差別是不是可以忽略 選擇這個(gè)某一樣品用來擴(kuò)增這個(gè)功能基因的時(shí)候，有沒有需要注意的地方！ 做熒光定量PCR的新手，望大家多指教  |
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wxl178725255
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【答案】應(yīng)助回帖
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xiangquanju(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2014-04-04 11:58:12
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xiangquanju(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心回帖交流 2014-04-04 11:58:12
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1.內(nèi)參基因一般不會(huì)只選擇一個(gè) 多選擇幾個(gè)吧，如果做真核的一般我們選B-actin，GAPDH，GUS...等 原核的話，你自己看看文獻(xiàn)，選擇幾個(gè)內(nèi)參 2.提醒一下，你構(gòu)建的質(zhì)粒，最后要切成線性 3.你檢測(cè)的是很多樣品中的某一個(gè)特定微生物物種的特定的某個(gè)/些基因，理論上可以從某個(gè)樣品中擴(kuò)，但最好如果有純種微生物樣品的DNA豈不是更好，減少干擾。 |
2樓2014-04-04 11:31:48
Jacob_24
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